本試驗(yàn)采用大腸桿菌腸桿菌科基因間重復(fù)一致序列PCR(ERIC-PCR)方法對(duì)從黑龍江省各養(yǎng)殖場分離的牛源大腸桿菌進(jìn)行基因分析,建立基因分型方法。同時(shí),擴(kuò)增ETEC的三種菌毛K99、F41和987P基因,構(gòu)建K99-987P-F41融合表達(dá)載體,以純化的K99-987P-F41重組蛋白免疫小鼠,并對(duì)其免疫效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。查閱文獻(xiàn)設(shè)計(jì)合成ERIC引物,通過反應(yīng)條件優(yōu)化,建立起ERIC-PCR檢測犢牛腹瀉大腸桿菌方法。應(yīng)用該方法對(duì)臨床分離的產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌菌株進(jìn)行基因分型。結(jié)果表明,ERIC-PCR檢測臨床分離的大腸桿菌可擴(kuò)增出2¹0條帶,可以分為17個(gè)基因型,其中以D型菌株最多。根據(jù)GenBank上已發(fā)表的ETEC三種菌毛K99、987P、F41基因序列,設(shè)計(jì)合成引物,經(jīng)PCR擴(kuò)增,將三段目的基因融合亞克隆至大腸桿菌原核表達(dá)載體pET30a(+)。經(jīng)鑒定的陽性質(zhì)粒K99-987P-F41轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3),經(jīng)IPTG誘導(dǎo)融合表達(dá)60 Ku左右的蛋白,蛋白大小與理論值相符合。Western Blot檢測結(jié)果表明,該蛋白具有良好的免疫活性。本試驗(yàn)利用常規(guī)方法...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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圖2-1大腸桿菌分離與鏡檢結(jié)果

圖2-1大腸桿菌分離與鏡檢結(jié)果A.伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基金屬光澤菌落；B.革蘭氏染色陰性Fig.2-1IsolationandidentificationofE.colistrainsresultsethylenebluemediumgrowthwith....

圖2-2大腸桿菌毒力因子多重PCR檢測結(jié)果

圖2-2大腸桿菌毒力因子多重PCR檢M.100bpDNAladdermarker；1~36.多重Fig.2-2E.colivirulencefactorsbymultiplexM.100bpDNAladdermarker；1~36.m....

圖2-3ERIC-PCR擴(kuò)增優(yōu)化結(jié)果

圖2-2大腸桿菌毒力因子多重PCR檢測M.100bpDNAladdermarker；1~36.多重PCFig.2-2E.colivirulencefactorsbymultiplexPCM.100bpDNAladdermarker；....

圖2-4部分菌株ERIC-PCR擴(kuò)增結(jié)果

株產(chǎn)腸毒素大腸桿菌樣品進(jìn)行基因分型。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂物大小在100bp~3000bp之間，擴(kuò)增條帶數(shù)為2~10條結(jié)果一致。ERIC-PCR大腸桿菌菌株的聚類分析分布在性。每個(gè)聚類內(nèi)部和聚類群之間的菌株的遺傳距離相同一定程度的相似性。同時(shí)也出現(xiàn)了遺傳關(guān)系較遠(yuǎn)、基因IC....

本文編號(hào)：3921380