【目的】研究羊口瘡病毒008蛋白的功能,用原核表達系統(tǒng)表達008基因,并對其進行生物信息學分析�！痉椒ā客ㄟ^重慶臨床分離株擴增得到008基因片段,將其連接到pET-28a(+)載體上,構(gòu)建重組表達質(zhì)粒,誘導表達該蛋白;對008蛋白利用ProtScale程序分析疏水性,TMHMM server v.2.0分析跨膜區(qū),SignalP 5.0 server預測信號肽以及通過Protean進行B細胞抗原表位預測分析�！窘Y(jié)果】羊口瘡008基因可以在E.coli中表達,重組蛋白分子量大小約為56 kd,主要以包涵體形式表達且與陽性血清產(chǎn)生特異性結(jié)合反應,具有良好的抗原性。生物信息學研究顯示,008蛋白屬于疏水性蛋白,無跨膜區(qū)及信號肽區(qū)域,其中B細胞表位可能存在11個�！窘Y(jié)論】構(gòu)建的pET-28a(+)-008質(zhì)粒在IPTG誘導下成功表達008蛋白,008蛋白具有良好的抗原性。

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【部分圖文】：

圖1羊口瘡病毒重慶分離株008基因的擴增

將pET-28a(+)質(zhì)粒與pMD19-T-008質(zhì)粒用NdeI、HindIII雙酶切后連接轉(zhuǎn)化置大腸桿菌BL21(DE3)中,構(gòu)建得到重組表達質(zhì)粒pET-28a(+)-008,挑取陽性單克隆進行PCR以及雙酶切鑒定,得到1500bp左右片段(圖2),測序比對結(jié)果正確,結(jié)果表....

圖2pET-28a(+)-008質(zhì)粒雙酶切鑒定

圖1羊口瘡病毒重慶分離株008基因的擴增2.3重組菌的誘導表達及SDS-PAGE分析

圖3008蛋白8、16h誘導表達SDS-PAGE結(jié)果

取重組誘導菌不同誘導時間的菌體分別進行SDS-PAGE分析,試驗確定IPTG誘導16h表達量最大,表達產(chǎn)物約為56kd,與預期蛋白條帶相符,而未誘導菌和誘導后的空載體均未出現(xiàn)次蛋白條帶(圖3、圖4)。對超聲裂解細菌的上清和沉淀進行SDS-PAGE分析,表明重組蛋白以包涵體的形....

圖8008蛋白綜合預測結(jié)果

圖7SignalP對008蛋白的信號肽預測3討論

本文編號：3921407