粘蛋白(mucins),又稱上皮粘蛋白,是組織上皮細胞產(chǎn)生的,由膜結(jié)合和分泌型糖蛋白所組成的大分子蛋白家族。它在潤滑、保護表皮細胞以及調(diào)節(jié)細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等方面發(fā)揮著重要的作用。MUC4和MUC13蛋白作為粘蛋白家族的主要成員,在機體抗產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌感染的過程中發(fā)揮著重要的作用。已有相關(guān)研究表明,MUC4和MUC13基因是ETEC F4抗性重要的候選基因,MUC4基因第17內(nèi)含子243位點和MUC13基因第2內(nèi)含子插入缺失突變已被作為仔豬F4大腸桿菌抗性潛在的重要遺傳標記。本研究一方面以大白豬為素材,從DNA、mRNA水平,分析MUC4和MUC13基因的多態(tài)性與mRNA的表達、機體細胞因子水平、生產(chǎn)性狀及繁殖性能的關(guān)系,在系統(tǒng)分析MUC4和MUC13基因突變遺傳效應(yīng)的基礎(chǔ)上評估其作為抗性遺傳標記用于分子選育的可行性。另一方面以課題組前期建立的蘇太豬和梅山豬F18大腸桿菌抗性型和易感型群體為素材,從mRNA水平,分析MUC4及MUC13基因在35日齡蘇太豬和梅山豬斷奶仔豬F18抗性與敏感型個體間的表達差異及其時空表達規(guī)律,探討MUC4及MUC13基因在作為ETEC F4抗性基因的同時,能...

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
符號說明
第一章 文獻綜述
    1. 仔豬腹瀉對養(yǎng)豬業(yè)的影響
    2. 主要產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌病的致病機理
    3. MUC4及MUC13基因的研究進展
    4. 一般抗病力的評價指標
    5. 蘇太豬產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌F18抗性與敏感型個體的篩選
    6. 梅山豬產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌F18抗性與敏感型資源群體的制備
    7. 本研究的目的及意義
第二章 豬MUC4基因第17內(nèi)含子243位點的遺傳效應(yīng)分析
    1. 試驗材料
        1.1 試驗動物
        1.2 主要儀器
        1.3 主要試劑
        1.4 主要試劑的配制
    2. 試驗方法
        2.1 基因多態(tài)性分析
            2.1.1 DNA提取方法
            2.1.2 引物設(shè)計
            2.1.3 PCR擴增
            2.1.4 瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物
            2.1.5 酶切反應(yīng)體系
            2.1.6 聚丙烯酰胺凝膠電泳
            2.1.7 PCR產(chǎn)物測序
        2.2 基因表達分析
            2.2.1 提取RNA的前期準備工作
            2.2.2 采用Trizol法提取組織總RNA
            2.2.3 RNA甲醛變性電泳檢測
            2.2.4 總RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA
            2.2.5 目的基因和內(nèi)參基因引物PCR檢測
            2.2.6 實時熒光定量PCR
        2.3 細胞因子的測定
            2.3.1 樣本的采集與血清的分離
            2.3.2 操作流程
        2.4 生產(chǎn)性狀及繁殖性能的測定
        2.5 統(tǒng)計分析
    3. 結(jié)果與分析
        3.1 PCR引物的擴增效果檢測
        3.2 MUC4基因第17內(nèi)含子多態(tài)性PCR-RFLP分析
        3.3 序列分析結(jié)果
        3.4 大白豬MUC4基因第17內(nèi)含子基因型及等位基因頻率分析
        3.5 大白豬MUC4基因第17內(nèi)含子多態(tài)性與部分細胞因子水平的關(guān)聯(lián)分析
        3.6 大白豬MUC4基因第17內(nèi)含子多態(tài)性與生產(chǎn)性狀以及不同胎次繁殖性能的關(guān)系
        3.7 總RNA純度與完整性
        3.8 實時熒光定量引物常規(guī)PCR檢測結(jié)果
        3.9 實時熒光定量PCR的溶解曲線
        3.10 大白豬MUC4基因第17內(nèi)含子A243G位點3種基因型個體間的表達規(guī)律
        3.11 蘇太豬MUC4基因不同發(fā)育時期個體間的表達分析
        3.12 蘇太豬抗性與敏感型個體間MUC4基因的表達分析
        3.13 梅山豬抗性與敏感型個體間MUC4基因的表達分析
    4. 討論
第三章 豬MUC13基因第2內(nèi)含子插入突變的遺傳效應(yīng)分析
    1. 試驗材料
    2. 試驗方法
        2.1 引物設(shè)計
        2.2 PCR擴增
    3. 結(jié)果與分析
        3.1 PCR產(chǎn)物直接電泳分析
        3.2 大白豬MUC13基因第2內(nèi)含子基因型及等位基因頻率分析
        3.3 大白豬MUC13基因第2內(nèi)含子多態(tài)性與免疫指標的關(guān)系
        3.4 大白豬MUC13基因第2內(nèi)含子多態(tài)性與生產(chǎn)性狀以及不同胎次繁殖性能的關(guān)系
        3.5 總RNA純度與完整性
        3.6 實時熒光定量引物常規(guī)PCR檢測結(jié)果
        3.7 實時熒光定量PCR的溶解曲線
        3.8 大白豬MUC13第2內(nèi)含子插入缺失突變3種基因型個體間的表達規(guī)律
        3.9 蘇太豬MUC13基因不同發(fā)育時期不同組織的表達分析
        3.10 蘇太豬抗性與敏感型個體間MUC13基因的表達分析
        3.11 梅山豬抗性與敏感型個體間MUC13基因的表達分析
    4. 討論
全文結(jié)論
參考文獻
致謝
攻讀學位期間發(fā)表學術(shù)論文



本文編號：3916584