口蹄疫（foot and mouth disease，F(xiàn)MD）、小反芻獸疫（peste des petits ruminants，PPR）和羊痘（capripox，CP）是危害山羊、綿羊等小型反芻動物的3種重大疫病，均為世界動物衛(wèi)生組織（OIE）發(fā)布的A類烈性傳染病。3種疫病的病原分別是口蹄疫病毒（foot and mouth disease virus，F(xiàn)MDV）、小反芻獸疫病毒（peste des petits ruminants virus，PPRV）和羊痘病毒（capripoxvirus，CPV）。目前這3類疫病的防控主要依靠滅活苗或弱毒苗，在實際應用中存在著免疫持續(xù)期短、熱穩(wěn)定性差、病毒毒力有返強風險等諸多缺陷。因此，需要研制更為安全高效的新型疫苗。 病毒載體是現(xiàn)代生物科學研究的熱點之一，諸多病毒載體已成功構建，并成為研制新型疫苗的候選工具。羊痘病毒活載體就是其中之一。在上述3種感染羊的病毒中，PPRV的H蛋白和F蛋白是刺激機體產生中和抗體的主要抗原；而FMDV的P1-2A在3C的作用下可以形成病毒的核衣殼，是中和抗體產生的主要誘導物，其中P1蛋白中的VP1片段是抗原決定簇最...

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【學位級別】：博士

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摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 小反芻獸疫疫苗研究進展
        1.1.1 PPR 簡介
        1.1.2 PPR 弱毒疫苗
        1.1.3 重組標記疫苗
        1.1.4 小結與展望
    1.2 口蹄疫疫苗研究進展
        1.2.1 口蹄疫簡介
        1.2.2 滅活抗原疫苗
        1.2.3 新型分子疫苗
        1.2.4 基礎研究在合理設計 FMD 疫苗中的作用
    1.3 羊痘病毒研究進展
        1.3.1 羊痘簡介
        1.3.2 羊痘病毒基因組研究進展
        1.3.3 羊痘疫苗研究進展
        1.3.4 羊痘病毒活載體研究進展
    1.4 本研究的目的和意義
第二章 重組轉移載體的設計、構建與功能驗證
    2.1 材料與方法
        2.1.1 材料與試劑
        2.1.2 重組質粒的設計
        2.1.3 重組質粒的構建
        2.1.4 啟動子 p11 和 p7.5 功能的驗證
    2.2 結果
        2.2.1 目的片段 PCR 結果
        2.2.2 重組質粒酶切鑒定結果
        2.2.3 重組質粒測序結果
        2.2.4 轉染 LT 細胞結果
    2.3 討論
        2.3.1 同源臂的設計
        2.3.2 載體設計與構建策略
        2.3.3 啟動子功能的驗證
第三章 重組山羊痘病毒的產生與純化
    3.1 材料與方法
        3.1.1 材料與試劑
        3.1.2 重組質粒的制備
        3.1.3 GPV 基因組 DNA 的提取
        3.1.4 重組質粒與 GPV 共轉染 LT 細胞
        3.1.5 重組 GPV（rGPV）的篩選與純化
    3.2 結果
        3.2.1 重組質粒轉染 LT 細胞的結果
        3.2.2 重組 GPV 的篩選結果
        3.2.3 重組 GPV 的純化結果
    3.3 討論
        3.3.1 同源重組的基本過程
        3.3.2 痘病毒基因組 DNA 的復制
        3.3.3 提高同源重組的效率
        3.3.4 重組 GPV 的篩選策略
        3.3.5 重組 GPV 的純化
第四章 重組山羊痘病毒外源基因的鑒定
    4.1 材料與方法
        4.1.1 材料與試劑
        4.1.2 RT-PCR 檢測 rGPV 外源基因的轉錄
        4.1.3 rGPV 中外源基因表達產物的檢測
    4.2 結果
        4.2.1 rGPV 中外源基因 RT-PCR 結果
        4.2.2 rGPV 中外源基因的表達結果
    4.3 討論
        4.3.1 病毒基因轉錄的特點
        4.3.2 痘病毒基因轉錄的主要元件和轉錄后加工
        4.3.3 病毒蛋白的翻譯及其翻譯后加工
        4.3.4 rGPV 中外源基因的轉錄和翻譯
第五章 rGPV 的免疫效果測定
    5.1 材料與方法
        5.1.1 試劑及疫苗制備
        5.1.2 動物分組及免疫程序
        5.1.3 抗體水平及效價測定
        5.1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計及分析
    5.2 結果
        5.2.1 rGPV 病毒滴度
        5.2.2 抗體水平與效價
    5.3 討論
        5.3.1 痘病毒感染的免疫反應
        5.3.2 抗體水平的變化
第六章 全文結論
參考文獻
致謝
作者簡歷



本文編號：3914729