旨為研究懸浮MDCK細(xì)胞在長期傳代過程中細(xì)胞生長穩(wěn)定性與病毒生產(chǎn)穩(wěn)定性。以懸浮MDCK細(xì)胞為研究對(duì)象,通過對(duì)該細(xì)胞進(jìn)行了長達(dá)200多天的傳代培養(yǎng),考察了傳代過程中各代次細(xì)胞的生長情況以及對(duì)H9N2禽流感病毒的生產(chǎn)能力差異;探究了不同培養(yǎng)基稀釋比例和MOI等工藝參數(shù)條件對(duì)長期傳代的懸浮MDCK細(xì)胞生產(chǎn)H9N2禽流感病毒過程的影響關(guān)系;另外,從ROS水平和細(xì)胞周期兩方面,研究了高低代次細(xì)胞的病毒生產(chǎn)能力差異的內(nèi)在原因。結(jié)果顯示,各代次懸浮MDCK細(xì)胞形態(tài)相似,細(xì)胞生長能力無顯著性差異,表明該細(xì)胞在長期傳代過程中細(xì)胞生長穩(wěn)定性良好。但HA滴度隨細(xì)胞代次的增加而增加,最高代次細(xì)胞(P111)的病毒滴度較最低代次細(xì)胞(P1)約高0.5 Log₂HAU/100 μL;P111細(xì)胞在不同工藝下病毒產(chǎn)量均高于P1細(xì)胞,表明了該細(xì)胞長期傳代后病毒生產(chǎn)能力略有提高。最后,研究發(fā)現(xiàn),與P1相比,P111胞內(nèi)ROS水平較低并且G0/G1期細(xì)胞的比例較高,此現(xiàn)象可能是高代次細(xì)胞產(chǎn)量提高的原因。

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圖4各代次懸浮MDCK細(xì)胞流感病毒HA滴度(A)與單細(xì)胞產(chǎn)毒率(B)隨時(shí)間變化

圖3各代次懸浮MDCK細(xì)胞批培養(yǎng)過程中活細(xì)胞密度(A),細(xì)胞活率(B)以及比生長速率(C)變化2.3不同生產(chǎn)工藝下高低代次細(xì)胞產(chǎn)毒情況驗(yàn)證

圖5不同稀釋比例下高低代次懸浮MDCK細(xì)胞所產(chǎn)流感病毒最高HA滴度(A)與最高單細(xì)胞產(chǎn)毒率(B)

為驗(yàn)證不同代次細(xì)胞產(chǎn)毒差異情況是否受細(xì)胞液稀釋比例的影響,本實(shí)驗(yàn)將P1、P111細(xì)胞作為研究對(duì)象,考察高低代次細(xì)胞在不同稀釋比例下的最高病毒產(chǎn)量(HAmax與svymax)。由圖5可見,新鮮培養(yǎng)基比例越高,HAmax與svymax越高,說明營養(yǎng)物質(zhì)越充足越有利于此懸浮MDCK細(xì)胞....

圖1各代次懸浮MDCK細(xì)胞的形態(tài)

2.1.3不同代次細(xì)胞的批培養(yǎng)穩(wěn)定性為考察各代次細(xì)胞在有限營養(yǎng)環(huán)境中的生長能力,將各代次細(xì)胞進(jìn)行為期9d批培養(yǎng)實(shí)驗(yàn),結(jié)果見圖3。結(jié)果顯示,在此過程中各代次細(xì)胞的活細(xì)胞密度、細(xì)胞活率、比生長速率變化趨勢相似,且均在第5天達(dá)到最高活細(xì)胞密度(VCDmax),并未出現(xiàn)隨細(xì)胞代次增加....

圖2各代次懸浮MDCK細(xì)胞傳代過程中活細(xì)胞密度(A),細(xì)胞直徑(B)以及比生長速率(C)變化

將各代次細(xì)胞以培養(yǎng)基與細(xì)胞液體積比為1∶1的常規(guī)工藝稀釋接毒,考察長時(shí)間傳代后懸浮MDCK細(xì)胞產(chǎn)毒能力的變化情況。結(jié)果顯示(圖4),各代次細(xì)胞接種流感病毒后48hpi內(nèi)HA滴度不斷增加,隨后趨于穩(wěn)定。對(duì)比P1、P111病毒產(chǎn)量,24hpi與48hpi兩代次存在顯著性差異(P....

本文編號(hào)：3910335