豬肝羧酸酯酶(Pig liver esterase, PLE),屬于絲氨酸蛋白酶,是由多種同工酶組成的酶家族,其中豬肝羧酸酯酶1(PLE1)含量較高,是該家族的重要成員。PLE具有高度的水解活性和立體選擇性,成為有機合成中主要的水解酶之一。但PLE作為藥物代謝酶的角色,在豬的藥物代謝和解毒中是否發(fā)揮作用尚未見報道。據(jù)其在有機化學(xué)合成中顯示出的強大水解活性,以及人類CES顯示出的重要藥物代謝和解毒作用,推測PLE可能在豬用藥物代謝中發(fā)揮不可忽視的作用,并由此影響藥物的療效和毒副作用,因此,本課題擬研究PLE1是否水解臨床獸藥、水解特點及機制,為豬臨床合理用藥提供必要的理論依據(jù),具有重要的理論和實踐意義。 本課題在功能性表達PLE1的基礎(chǔ)上,首先通過PLE1的體外水解抑制試驗,快速檢測了83種臨床上常用的各種類型獸藥對PLE1水解p-NPA的抑制作用,以篩選獲得可能被PLE1水解的獸藥種類；測定了獸藥對PLE1的抑制常數(shù),以確定抑制類型,進一步預(yù)測藥物被PLE1水解的可能性；建立高效液相色譜(HPLC)及液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)等儀器分析方法,定量檢測PLE1對獸藥的水解,確...

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語(Abbreviation)
1 文獻綜述
    1.1 藥物代謝
        1.1.1 概述
        1.1.2 藥物的生物轉(zhuǎn)化
    1.2 藥物代謝酶
    1.3 羧酸酯酶
        1.3.1 概述
        1.3.2 羧酸酯酶的命名
        1.3.3 羧酸酯酶的基因結(jié)構(gòu)
        1.3.4 羧酸酯酶的結(jié)構(gòu)
        1.3.5 羧酸酯酶的催化機理
        1.3.6 羧酸酯酶的功能
        1.3.7 羧酸酯酶的誘導(dǎo)表達
        1.3.8 羧酸酯酶的抑制劑
    1.4 豬肝羧酸酯酶
        1.4.1 概述
        1.4.2 豬肝接酸醋酶同工酶
        1.4.3 豬肝羧酸酯酶的結(jié)構(gòu)
    1.5 橫胺類藥物及其分析方法
        1.5.1 磺胺類藥物概述
        1.5.2 磺胺類藥物檢測方法
        1.5.3 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜在磺胺類藥物檢測分析中的應(yīng)用
2 研究目的與意義
3 材料與方法
    3.1 試驗材料
        3.1.1 藥物標(biāo)準(zhǔn)品
        3.1.2 其他試劑
        3.1.3 主要儀器
        3.1.4 試劑配制
    3.2 試驗方法
        3.2.1 體外酶水解抑制試驗
        3.2.2 HPLC測定酶對泰樂菌素作用
        3.2.3 抑制常數(shù)的測定與分配系數(shù)的獲取
        3.2.4 LC-MS/MS定酶對磺胺類的降解
        3.2.5 同源模建及分子對接
4 結(jié)果與分析
    4.1 藥物抑制PLE1水解p-NPA的情況
    4.2 PLE1對泰樂菌素作用的研究
        4.2.1 泰樂菌素高效液相條件的優(yōu)化
        4.2.2 泰樂菌素的水解情況
    4.3 磺胺類藥物抑制常數(shù)的測定與分配系數(shù)的確定
        4.3.1 抑制常數(shù)K_i的測定結(jié)果
        4.3.2 分配系數(shù)XlogP值的確定
        4.3.3 藥物logK_i值與XlogP值相關(guān)性分析
    4.4 LC-MS/MS測定PLE1對磺胺類的降解
        4.4.1 LC-MS/MS質(zhì)譜優(yōu)化結(jié)果
        4.4.2 典型色譜圖
        4.4.3 藥物濃度與響應(yīng)值線性關(guān)系
        4.4.4 米氏常數(shù)與最大反應(yīng)速率
        4.4.5 米氏常數(shù)與抑制常數(shù)相關(guān)性分析
    4.5 同源模建及分子對接
        4.5.1 同源模建
        4.5.2 分子對接
        4.5.3 結(jié)合能量的測定
5 討論
    5.1 藥物的初步篩選
    5.2 藥物分析方法的選擇
    5.3 藥物理化參數(shù)XlogP的選擇
    5.4 酶與小分子作用機理
    5.5 磺胺類藥物代謝及其對療效的影響
6 結(jié)論
參考文獻
附錄
致謝



本文編號：3904158