脂肪酸去飽和酶-3(fatty acid desaturase 3, FAD3)基因編碼n-3多不飽和脂肪酸脫氫酶,能夠?qū)-6多不飽和脂肪酸(polyunsaturated fatty aci ds, PUFAs)轉(zhuǎn)化成n-3 PUFAs。本試驗(yàn)成功構(gòu)建基因打靶載體pCSN2-hF AD3和具有切割活性的pCas-Guide-1載體。利用CRISPR/Cas9技術(shù)將hFAD3基因定點(diǎn)整合到CSN2位點(diǎn),研究hFAD3基因在乳腺細(xì)胞中特異表達(dá),及其對(duì)脂肪酸相關(guān)基因表達(dá)的影響。結(jié)果表明,(1)外源基因已定點(diǎn)整合到了CSN2靶位點(diǎn)。(2)實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)hFAD3基因在轉(zhuǎn)染后乳腺細(xì)胞和成纖維細(xì)胞中的表達(dá)結(jié)果顯示,乳腺細(xì)胞中hFAD3基因的表達(dá)量為成纖維細(xì)胞中的2.5倍(P<0.01),說(shuō)明hFAD3基因的表達(dá)具有一定的乳腺特異性。(3)脂肪酸含量分析結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染后細(xì)胞n-6/n-3比值較對(duì)照細(xì)胞顯著下降(P<0.01)。(4)脂肪酸相關(guān)基因的表達(dá)檢測(cè)結(jié)果顯示,兩種細(xì)胞中脂肪分解相關(guān)基因(LPL、LIPE和PPARg)表達(dá)量大于脂肪合成相關(guān)基因(FASN、ACC和SCD)。(...

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一部分 研究論文 CRISPR/Cas9介導(dǎo)hFAD3基因在奶牛CSN2位點(diǎn)定點(diǎn)整合研究
    前言
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
            1.2.1 pCas-Guide載體構(gòu)建及活性檢測(cè)
            1.2.2 打靶載體的構(gòu)建
            1.2.3 pCas-Guide-1載體與pCSN2-hFAD3載體共轉(zhuǎn)染HST胎兒成纖維細(xì)胞與乳腺細(xì)胞及相關(guān)檢測(cè)
    2 結(jié)果
        2.1 pCas-Guide載體構(gòu)建及活性檢測(cè)
        2.2 打靶載體pCSN2-hFAD3的構(gòu)建
        2.3 pCas-Guide-1載體與pCSN2-hFAD3載體共轉(zhuǎn)染HST胎兒成纖維細(xì)胞與乳腺細(xì)胞
            2.3.1 轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的鑒定及相關(guān)檢測(cè)
            2.3.2 單克隆細(xì)胞的篩選及鑒定
    3 討論
        3.1 β-酪蛋白啟動(dòng)子及其對(duì)hFAD3基因表達(dá)的調(diào)控
        3.2 hFAD3基因表達(dá)對(duì)細(xì)胞中n-6/n-3比例的影響
        3.3 hFAD3基因表達(dá)對(duì)脂肪酸相關(guān)基因表達(dá)影響
    4 結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
第二部分 文獻(xiàn)綜述 n-3 多不飽和脂肪酸去飽和酶基因及乳腺特異啟動(dòng)子研究進(jìn)展
    1 n-3多不飽和脂肪酸去飽和酶基因研究進(jìn)展
    2 常用乳腺特異啟動(dòng)子研究進(jìn)展
    3 乳腺特異表達(dá)脂肪酸去飽和酶基因研究進(jìn)展
    4 結(jié)語(yǔ)
    參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間的學(xué)術(shù)成果



本文編號(hào)：3901927