miRNA對細胞的增殖和分化以及不同階段的肌肉發(fā)育都有著十分重要的調節(jié)作用，本研究構建了豬miRNA-378過表達載體，通過轉染豬胎兒成纖維細胞系（PEF,porcine embryo fibroblast），在細胞水平驗證過表達載體的表達效率。利用原核顯微注射技術制備轉基因小鼠，通過分子生物學方法分析轉基因小鼠的整合效率及表達效率，并對miRNA-378在轉基因小鼠上的生物學功能進行初步分析。 從大白豬（sus scrofa）基因組的DNA上擴增miRNA-378擴增前體序列，通過XhoI酶切后回收相應片段，連接到pEGP-miR載體中，成功構建重組載體pEGP-miR-378并轉染豬胎兒成纖維細胞系（PEF,porcine embryo fibroblast）,通過熒光觀察轉染效率及報告基因的表達效率，利用實時熒光定量PCR（QRT-PCR）測定細胞內miRNA-378的表達活性。結果表明，成功構建了重組載體pEGP-miR-378；熒光觀察轉染后的細胞，顯示有較高的轉染效率，報告基因有較高的表達效率；QRT-PCR結果顯示，試驗組較對照組miRNA-378表達顯著提高，試驗組較對...

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【學位級別】：碩士

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圖1：let-7RNA表達情況的比較

圖1：let-7RNA表達情況的比較Fig.1Comparisonoflet-7RNAexpression（PasquinelliAE,ReinhareBJ,SlackF,etal.,Conservationofthesequenceand....

圖2：動物miRNA的生物合成過程

3圖2：動物miRNA的生物合成過程Fig2:ThebiogenesisofanimalmiRNAslDP.miRNAsgenomics,biogenesis,mechanism,andfunctio結構保守性多數(shù)miRNA來看，他們中大部分都是發(fā)....

圖3小鼠肌肉發(fā)生模式圖

Hong2009）。這些由病毒編碼的miRNA與宿主基因組不具有同源性，而且至今它們的功能尚不清楚。與之相反的，在細胞的培養(yǎng)的過程中，一種由細胞編碼的miRNA-miR-32對PFV-1（primatefoamyvirustype1）的增殖進行調控（Hendr....

圖4：原核顯微注射法生產(chǎn)轉基因羊Fig4:Productionoftransgenicsheepwithpronuclearmicroinjection(Clark,J,Whitelaw,B.,etal.Afuturefortransgeniclivestock.NatRevGenet,2003)

動物中到目前為止，可能并不能得到應用，目前敲除、插入轉基因體細胞的是應用較為普遍的（Zhou2003）。1.4.2常見的動物轉基因的技術1.4.2.1顯微原核注射法顯微原核注射法是目前很成熟的一種獲得轉基因動物的實驗技術，其基本操作：在顯微鏡下，將外源目的基因采用微吸管，注....

本文編號：3899579