本文關(guān)鍵詞：苜蓿皂苷的制備及其生物活性的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：苜蓿皂苷是苜蓿體內(nèi)生物活性較強的次生代謝產(chǎn)物,飼料中添加苜蓿皂苷可以降低雞蛋膽固醇、降低仔豬腹瀉率、提高動物機體抗氧化能力。本課題通過制備苜蓿皂苷,研究苜蓿皂苷對雞胚血管生成的作用和對雞胚脂肪代謝的影響。采用薄層色譜(TLC)和高效液相色譜(HPLC)技術(shù)相結(jié)合,建立苜蓿皂苷的分離檢測方法,進一步用液-質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對皂苷單體分子進行鑒定,采用體外法對苜蓿皂苷的抗氧化活性進行研究;以雞胚絨毛尿囊膜為模型,研究苜蓿皂苷對雞胚血管生長的影響;探討苜蓿皂苷對雞胚發(fā)育過程中脂肪代謝的影響。1.以甲醇為萃取劑,超聲波輔助萃取苜蓿皂苷;以氯仿-甲醇-水(65:35:10,下層)做展開劑,經(jīng)TLC(薄層板規(guī)格5 cm×20 cm)分離后于254 nm處觀察并收集不同比移值的分離組分,獲得5種皂苷化合物,比移值分別為I(0.08)、II(0.18)、III(0.49)、IV(0.63)、V(0.80);將5種皂苷化合物經(jīng)高效液相色譜(HPLC)進一步分離,色譜柱為Venusil Mp C18(2)(4.6 mm×250 mm),在室溫下以甲醇-水(15:85)為流動相,流速為0.15 mL/min、0.2 mL/min,以及甲醇-水(20:80)做流動相,流速為0.3 mL/min,檢測波長為200 nm,共獲得13種苜蓿皂苷單體。采用液-質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對獲得的皂苷單體進行鑒定,得到質(zhì)荷比(m/z)為475的離子碎片峰,經(jīng)比對該離子碎片可能為大豆皂醇A(分子量474)或類似物。苜蓿皂苷在體外有較強的抗氧化能力,當(dāng)苜蓿皂苷濃度從0.09mg/mL提升至0.72 mg/mL時,羥基自由基(?OH)的清除率從17.46%提升至70.29%,超氧自由基(O2-?)的清除率從9.23%提升至46.38%,DPPH自由基的清除率從26.86%提升至76.12%。2.以雞胚絨毛尿囊膜為模型,研究苜蓿皂苷在0.00~0.36 mg/mL濃度范圍內(nèi)對血管生成的影響。選擇新鮮、健康種蛋150枚,自然生長組10枚不做任何處理,做陽性對照,試驗組分別在絨毛尿囊膜上放置0.00 mg/mL(0劑量)、0.09 mg/mL(低劑量)、0.18 mg/mL(中劑量)、0.36 mg/mL(高劑量)的3 mm自制苜蓿皂苷藥片。結(jié)果表明:中劑量組的一、二級血管數(shù)量與0劑量組相比平均分別增加了34條和42條,高劑量試驗組分別增加了63條、69條血管,均達到了顯著水平(P0.05)。與對照組相比,中、高劑量組的小血管數(shù)量極顯著的增加,分別平均增加了26條、46條血管(P0.01);而低、中、高劑量的三個試驗組中大血管的數(shù)量與0劑量組相比血管增加數(shù)量不明顯(P0.05),平均分別增加了3條、3條和2條血管。說明在0.00~0.36 mg/mL范圍內(nèi),苜蓿皂苷可以顯著增加雞胚絨毛尿囊膜苜蓿皂苷藥片周圍小血管的密度與數(shù)量,對血管的新生有促進作用,且其促血管生長作用與苜蓿皂苷的濃度呈正相關(guān)性。3.以微孔注射方式,在雞胚發(fā)育的3個關(guān)鍵時間點注射苜蓿皂苷,研究不同注射時間對雞胚發(fā)育的影響。選擇新鮮、健康種蛋220枚,采用單因素實驗設(shè)計,對照組正常孵化,試驗組分別在入孵前、第7胚齡、第18胚齡時注射0.32 mg/mL的苜蓿皂苷溶液100?L。試驗結(jié)果表明:(1)不同時間注射苜蓿皂苷對雛雞的出生體重沒有影響(P0.05),但可以提高雛雞的出殼率。18胚齡注射組的出殼率最高,與入孵前注射組和7胚齡注射組相比提高了12.5%和10.7%。(2)7胚齡注射苜蓿皂苷對血清中血脂的降低效果最好,第7胚齡注射組的總膽固醇、甘油三酯含量與對照組相比分別降低了74.45%、46.61%,均達到了極顯著水平(P0.01);低密度脂蛋白膽固醇顯著下降了48.5%(P0.05)。18胚齡注射苜蓿皂苷血清中抗氧化力最高,與對照組相比,18胚齡注射組血清總抗氧化能力極顯著提高了42.25%(P0.01),總超氧化物歧化酶提高了35.56%(P0.05)。而各處理組高密度脂蛋白膽固醇含量降低不明顯(P0.05)。(3)與對照組相比,7胚齡注射組肌肉中總飽和脂肪酸含量為66.41%,降低了4.37%;而總不飽和脂肪酸占26.47%,增加了3.55%。7胚齡注射組腹脂中總飽和脂肪酸含量為36.33%,較空白對照組降低了1.24%;總不飽和脂肪酸含量為63.36%,較空白對照組增加了2.64%。苜蓿皂苷改善了腿肌和腹脂中的飽和脂肪酸與不飽和脂肪酸的比例,第7胚齡注射組改善效果最優(yōu)。
【關(guān)鍵詞】：苜蓿皂苷 雞胚 血管生成 脂肪代謝
【學(xué)位授予單位】：河南工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S816
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-13
• 1 緒論13-22
• 1.1 課題研究目的與意義13
• 1.2 苜蓿皂苷的組成與分布13-15
• 1.2.1 苜蓿皂苷的組成13-14
• 1.2.2 苜蓿皂苷的含量分布14-15
• 1.3 苜蓿皂苷的制備與含量測定15-17
• 1.3.1 苜蓿皂苷的分離提取15
• 1.3.2 苜蓿皂苷的純化15
• 1.3.3 苜蓿皂苷含量測定15-17
• 1.4 苜蓿皂苷單體的分子結(jié)構(gòu)研究進展17-18
• 1.5 苜蓿皂苷在動物生產(chǎn)上的應(yīng)用18-20
• 1.5.1 在反芻動物生產(chǎn)上的應(yīng)用18-19
• 1.5.2 在單胃動物生產(chǎn)上的應(yīng)用19-20
• 1.6 研究內(nèi)容和研究方法20-22
• 1.6.1 研究內(nèi)容20
• 1.6.2 研究方法20-21
• 1.6.3 技術(shù)路線21-22
• 2 試驗研究22-52
• 試驗一 苜蓿皂苷的制備、結(jié)構(gòu)分析及抗氧化活性研究22-33
• 1.1 前言22
• 1.2 材料與方法22-24
• 1.2.1 樣品與試劑22-23
• 1.2.2 主要儀器設(shè)備23
• 1.2.3 實驗方法23-24
• 1.3 結(jié)果與分析24-30
• 1.3.1 苜蓿皂苷的薄層層析（TLC）24-27
• 1.3.2 苜蓿皂苷的HPLC分離27-28
• 1.3.3 苜蓿皂苷液相－質(zhì)譜分離圖譜28-29
• 1.3.4 苜蓿皂苷抗氧化研究29-30
• 1.4 討論30-32
• 1.4.1 薄層層析展開劑的選擇30-31
• 1.4.2 高效液相分離苜蓿皂苷條件優(yōu)化31
• 1.4.3 液－質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對苜蓿皂苷單體的確證31-32
• 1.4.4 苜蓿皂苷抗氧化能力分析32
• 1.5 小結(jié)32-33
• 試驗二 苜蓿皂苷對雞胚絨毛尿囊膜血管生成的影響研究33-41
• 2.1 前言33
• 2.2 試驗材料33-34
• 2.3 試驗方法34-35
• 2.3.1 苜蓿皂苷藥片的制備34
• 2.3.2 實驗設(shè)計34
• 2.3.3 雞胚絨毛尿囊膜模型制備34-35
• 2.3.4 統(tǒng)計分析35
• 2.4 結(jié)果與分析35-39
• 2.4.1 種蛋孵化過程中的血管發(fā)育35-36
• 2.4.2 苜蓿皂苷對雞胚血管發(fā)育的影響36-38
• 2.4.3 苜蓿皂苷對雞胚生長發(fā)育的影響38-39
• 2.5 討論39-40
• 2.5.1 雞胚尿囊膜模型的建立39
• 2.5.2 苜蓿皂苷對血管和雞胚生長狀態(tài)的影響39-40
• 2.6 小結(jié)40-41
• 試驗三 苜蓿皂苷對雞胚發(fā)育期間脂肪代謝的影響研究41-52
• 3.1 前言41
• 3.2 試驗材料41-42
• 3.3 試驗方法42-43
• 3.3.1 皂苷注射液的配制42
• 3.3.2 實驗設(shè)計42
• 3.3.3 種蛋的注射42-43
• 3.3.4 樣品采集與指標(biāo)檢測43
• 3.3.5 統(tǒng)計分析43
• 3.4 結(jié)果與分析43-48
• 3.4.1 苜蓿皂苷對雛雞初生重及卵黃率的影響44
• 3.4.2 苜蓿皂苷對雞雛血脂和抗氧化能力的影響44-45
• 3.4.3 苜蓿皂苷對雞雛肌肉中脂肪酸含量的影響45-46
• 3.4.4 苜蓿皂苷對雞雛腹脂中脂肪酸含量的影響46-48
• 3.5 討論48-50
• 3.5.1 苜蓿皂苷對雞胚出生率的影響48-49
• 3.5.2 苜蓿皂苷對雞胚出雛重和卵黃率的影響49
• 3.5.3 苜蓿皂苷對雞胚血脂含量和血清抗氧化能力的影響49-50
• 3.5.4 苜蓿皂苷對雞肉脂肪代謝的影響50
• 3.6 小結(jié)50-52
• 3 結(jié)論52-54
• 3.1 主要結(jié)論52-53
• 3.2 有待進一步研究的問題53-54
• 參考文獻54-60
• 致謝60-61
• 個人簡歷61

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本文編號：389850