本文關(guān)鍵詞：西北部分地區(qū)豬蛔蟲形態(tài)學(xué)觀察及其種群遺傳變異分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：豬蛔蟲(Ascaris suum)是寄生在小腸的主要寄生線蟲之一,在集約化及散養(yǎng)豬場廣泛存在,呈世界性分布。該寄生蟲不僅嚴(yán)重造成豬只的增重及飼料回報(bào)率降低、肉品質(zhì)下降,而且還能引起臨床癥狀和病理損傷,如乳斑肝、嗜酸性粒細(xì)胞肺炎及免疫抑制等。已有研究表明,豬蛔蟲還能夠感染猩猩及人類。因此,找到消除豬蛔蟲的辦法對養(yǎng)豬業(yè)及人類健康具有重要意義。為了更為有效的防控豬蛔蟲病,就必須準(zhǔn)確鑒定豬蛔蟲。長期以來,動(dòng)物寄生蟲的分類主要是依據(jù)形態(tài)學(xué)特征。但是,有關(guān)豬蛔蟲形態(tài)學(xué)的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)以及分子分類鑒定資料還不夠完善。本研究擬對豬蛔蟲成蟲進(jìn)行剖解并測量其內(nèi)部器官,利用石蠟包埋切片法制作豬蛔蟲各個(gè)部分的組織切片,觀察其內(nèi)部形態(tài)結(jié)構(gòu),同時(shí)對豬蛔蟲線粒體cox1、nad1和nad4部分基因及核糖體(rDNA)內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ITS)進(jìn)行序列測定和分析并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹,探討西北部分地區(qū)豬蛔蟲的遺傳情況。結(jié)果如下:1.對豬蛔蟲體長、周長及假體腔內(nèi)主要器官的長度數(shù)據(jù)進(jìn)行了測量,發(fā)現(xiàn)雄性豬蛔蟲的體長為18.6±2.3 cm、周長為1.2±0.2 cm、食管長度為0.6±0.1 cm、貯精囊長度為4.9±1.0 cm、輸精管長度為63.8±16.4 cm、睪丸長度為42.6±12.3 cm。雌性豬蛔蟲的體長為26.8±2.7 cm、周長為1.7±0.2 cm、食管長為0.8±0.1 cm、單側(cè)子宮長度為17.7±3.4 cm、單側(cè)輸卵管長度為105.6±19.6 cm、單側(cè)卵巢長度為59.0±12.2 cm。經(jīng)單因素方差分析后,雄性豬蛔蟲與雌性豬蛔蟲之間在體長、周長及食管長存在顯著差異(P0.01)。并且通過制作組織切片,經(jīng)HE染色后在光學(xué)顯微鏡下觀察,獲得了豬蛔蟲較為完整的組織結(jié)構(gòu)圖。2.采用引物NC5/NC2,擴(kuò)增西北部分地區(qū)23條豬蛔蟲的ITS基因,對PCR產(chǎn)物進(jìn)行克隆、測序,依據(jù)GenBank上公布的ITS序列將測序結(jié)果截為ITS1、5.8S及ITS2三段,分析比對各段序列的差異性。結(jié)果顯示,所有樣品ITS序列長約1000 bp,其中ITS1、5.8S和ITS2的長度分別為450 bp~453 bp、159 bp、272 bp,種內(nèi)差異分別為0~0.2%、0、0�；贗TS1的種系發(fā)育分析表明,23個(gè)豬蛔蟲樣品均位于同一分支,而與貝屬蛔蟲分屬兩個(gè)不同分支。結(jié)果表明,ITS1序列不能作為區(qū)分西北不同地區(qū)豬蛔蟲的種內(nèi)分子標(biāo)記,但可以作為區(qū)分蛔屬蛔蟲與貝蛔屬蛔蟲的種間分子標(biāo)記。3.以西北部分地區(qū)24個(gè)豬蛔蟲樣品為研究對象,分別擴(kuò)增nad1、cox1和、nad4部分基因并進(jìn)行序列變異分析,成功擴(kuò)增出了豬蛔蟲的pnad1,pcox1和pnad4基因,其長度分別為480 bp、787 bp和811 bp,基因的A+T含量分別為69.69%~71.12%、65.54%~65.96%和68.46%~69.29%,其種內(nèi)變異分別為0~2.9%、0~2.1%和0~3.1%。基于pnad1、pcox1和pnad4序列的種系發(fā)育分析表明,中國西北地區(qū)豬蛔蟲與美國豬蛔蟲是兩個(gè)不同的地理株,該基因可以作為區(qū)分中國西北地區(qū)豬蛔蟲與美國地區(qū)豬蛔蟲的分子標(biāo)記,但不能作為區(qū)分西北部分地區(qū)之間豬蛔蟲樣品的分子標(biāo)記。綜上所述,本研究完善了豬蛔蟲的形態(tài)學(xué)數(shù)據(jù),并基于ITS及線粒體部分基因(nad1、cox1、nad4)研究了西北部分地區(qū)豬蛔蟲種群變異情況,為豬蛔蟲的流行病學(xué)調(diào)查及豬蛔蟲的鑒定分類提供了基礎(chǔ)資料。
【關(guān)鍵詞】：豬蛔蟲 形態(tài)學(xué) 內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū) 線粒體基因 種群變異
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.7
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-11
• 文獻(xiàn)綜述11-19
• 第一章 豬蛔蟲研究概況11-19
• 1.1 豬蛔蟲11-13
• 1.1.1 分類地位、寄生部位、宿主及分布11-12
• 1.1.2 形態(tài)學(xué)與生活史12-13
• 1.2 豬蛔蟲病13-15
• 1.2.1 流行病學(xué)特點(diǎn)、臨床癥狀及危害13-14
• 1.2.2 豬蛔蟲病的診斷14
• 1.2.3 豬蛔蟲病的預(yù)防及治療14-15
• 1.3 PCR技術(shù)及其在寄生蟲研究中的應(yīng)用15-16
• 1.4 分子標(biāo)記在寄生蟲種群遺傳結(jié)構(gòu)研究中的應(yīng)用16-18
• 1.4.1 ITS簡介及其在寄生蟲分類中的研究進(jìn)展16-17
• 1.4.2 線粒體DNA簡介及其在寄生蟲分類中的研究17-18
• 1.5 本研究的目的和意義18-19
• 實(shí)驗(yàn)研究19-44
• 第二章 豬蛔蟲形態(tài)學(xué)觀察及其解剖學(xué)測量19-27
• 2.1 材料與方法19-21
• 2.1.1 蟲體樣本19
• 2.1.2 主要儀器、試劑和溶液19-20
• 2.1.3 蟲體解剖并測量20
• 2.1.4 蟲體石蠟切片的制備20-21
• 2.1.5 蟲體石蠟切片的HE染色與觀察21
• 2.2 結(jié)果21-25
• 2.2.1 解剖測量結(jié)果21-23
• 2.2.2 HE染色觀察結(jié)果23-25
• 2.3 討論25-26
• 2.4 小結(jié)26-27
• 第三章 西北部分地區(qū)豬蛔蟲ITS基因的遺傳變異分析27-37
• 3.1 材料與方法27-32
• 3.1.1 蟲體樣本27-28
• 3.1.2 主要儀器設(shè)備和試劑28-29
• 3.1.3 引物的合成與稀釋29
• 3.1.4 蟲體基因組DNA的提取29-30
• 3.1.5 核糖體rDNA ITS基因擴(kuò)增30-31
• 3.1.6 ITS基因的純化、克隆、轉(zhuǎn)化鑒定及測序31-32
• 3.1.7 ITS基因的序列分析及遺傳變異分析32
• 3.2 結(jié)果32-35
• 3.2.1 PCR擴(kuò)增結(jié)果32-33
• 3.2.2 遺傳變異分析33-34
• 3.2.3 種群遺傳結(jié)構(gòu)分析34-35
• 3.3 討論35-36
• 3.4 小結(jié)36-37
• 第四章 西北部分地區(qū)豬蛔蟲nad1、cox1和nad4基因的遺傳變異分析37-44
• 4.1 材料與方法37-40
• 4.1.1 蟲體樣本37-38
• 4.1.2 主要儀器設(shè)備和試劑38
• 4.1.3 引物的合成及稀釋38-39
• 4.1.4 蟲體基因組DNA的提取39
• 4.1.5 PCR反應(yīng)及測序39
• 4.1.6 序列分析及進(jìn)化樹構(gòu)建39-40
• 4.2 結(jié)果40-43
• 4.2.1 PCR擴(kuò)增結(jié)果40-41
• 4.2.2 序列變異分析41-42
• 4.2.3 種群遺傳結(jié)構(gòu)分析42-43
• 4.3 討論43
• 4.4 小結(jié)43-44
• 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-53
• 致謝53-54
• 作者簡介54

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本文編號：391170