氨芐青霉素（AMP）是β-內(nèi)酰胺類抗生素的一種，屬于半抗原，為廣譜抗生素；另外，AMP還具有促進動物生長的作用，因此在畜牧業(yè)養(yǎng)殖中常被用作飼料添加劑或用于動物乳腺炎等疾病的防治，從而使動物源性食品中含有超標的AMP殘留，嚴重危害了人類健康。建立一種準確、快速、簡便的氨芐青霉素殘留檢測方法是十分必要的。 本研究首先通過制備高質(zhì)量的氨芐青霉素全抗原，免疫Balb/c小鼠，制備高親和力、高特異性的抗AMP單克隆抗體。在此基礎(chǔ)上，初步建立氨芐青霉素ELISA檢測技術(shù)。 （1）首先采用生理學(xué)法、EDC法、戊二醛法、NHS+EDC法、BS3法和SMCC六種方法將AMP與BSA、OVA和KLH三種載體蛋白偶聯(lián)，合成完全抗原。采用紫外掃描法和SDS-PAGE凝膠電泳法對偶聯(lián)效果進行了鑒定。 （2）將合成的抗原開展免疫原性分析，其中③號小鼠血清效價達到了2×105，③號小鼠血清敏感性最好，其抑制率達到了86.2%。 選擇③號小鼠利用雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體，共篩選出3株雜交瘤細胞株，分別為2C3、4E5和4C7。其中2C3雜交瘤細胞分泌抗體的性質(zhì)穩(wěn)定，效價也較高，用其制備腹水，大量制備單抗。純化后2C3...

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.1青霉素類藥物分子結(jié)構(gòu)

青霉素類抗生素是β-內(nèi)酰胺類抗生素中最為重要的一種，因其效率高、毒性低等特點而得到廣泛推廣及應(yīng)用。青霉素類抗生素的結(jié)構(gòu)框架是由β-內(nèi)酰胺環(huán)、噻唑環(huán)以及側(cè)鏈構(gòu)成的，側(cè)鏈的分子結(jié)構(gòu)變化可以形成各種不同的藥物（圖1.1）[1]。圖1.1青霉素類藥物分子結(jié)構(gòu)1.1.1理化性質(zhì)氨芐青霉....

圖1.2氨芐青霉素分子結(jié)構(gòu)

可以形成各種不同的藥物（圖1.1）[1]。圖1.1青霉素類藥物分子結(jié)構(gòu)質(zhì)AMP）屬于青霉素類抗生素，別名氨芐西林、安必仙、安比子式：C16H19N3O4S，分子量為349.40。正常狀態(tài)下呈結(jié)晶的刺激性氣味；微溶于水，不溶于脂肪油或氯仿等有機溶劑。粉末狀或結(jié)晶狀，基本沒有臭味，....

圖2.1生理學(xué)法交聯(lián)反應(yīng)

具體方法：稱取0.04g氨芐青霉素和0.025g載體蛋白BSA（OVA，0.02gKLH）溶解于5mlris-HCl（0.015mol/LpH8.8）中，然后在37℃恒溫搖床中反應(yīng)3h。反應(yīng)完成后，將反應(yīng)物裝析袋中用PBS（0.005mol/LpH7.4）在4℃下透析48h，....

圖2.2EDC介導(dǎo)的AMP與載體蛋白的偶聯(lián)反應(yīng)

圖2.1生理學(xué)法交聯(lián)反應(yīng)3.2碳化二亞胺法（EDC法）理：EDC是一種零長度交聯(lián)劑，即它在誘導(dǎo)酰胺鍵形成后不引入任何連接臂，在溫和條氨芐青霉素上的-COOH與蛋白質(zhì)上的-NH2偶聯(lián)生成酰胺鍵。首先是EDC先與氨芐青霉-COOH反應(yīng)生成一個中間產(chǎn)物，然后再與載體蛋白上的-N....

本文編號：3895259