禽呼腸孤病毒(Avian reovirus, ARV)是重要的家禽病原體之一,主要感染雞和火雞,引起雞病毒性關(guān)節(jié)炎、矮小綜合征、呼吸障礙綜合征、免疫抑制等,給全球養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。但目前關(guān)于ARV主要的研究方向是病原分離鑒定、基因組測(cè)序、檢測(cè)方法建立等,而對(duì)其分子致病機(jī)制的研究報(bào)道并不多。為了從根本上有效防控ARV感染,促進(jìn)全球養(yǎng)禽業(yè)的健康發(fā)展,開展禽呼腸孤病毒致病機(jī)制的研究刻不容緩。細(xì)胞因子因具有廣泛的生物學(xué)活性,是機(jī)體免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)的重要介質(zhì)。目前已證明細(xì)胞因子在結(jié)核病、AIV感染、雞傳染性法氏囊病毒感染、球蟲感染等疾病的致病過(guò)程中占有重要作用,但細(xì)胞因子在ARV感染導(dǎo)致機(jī)體廣泛炎癥和免疫抑制中的致病機(jī)制尚不清楚。 為探討ARV感染對(duì)細(xì)胞因子IL-1β、IL-6、IL-17、IL-18、IFN-γ和TNF-α的mRNA轉(zhuǎn)錄時(shí)相的影響,本研究首先建立了雞IL-1β、IL-6、IL-17、 IL-18、IFN-γ、TNF-α和GAPDH基因的SYBR Green Ⅰ熒光定量PCR檢測(cè)方法,然后用禽呼腸孤病毒標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒株S1133分別感染雞胚成纖維細(xì)胞(CEF)和7日齡SPF雛...

【文章頁(yè)數(shù)】：77 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮寫-中文對(duì)照表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 禽呼腸孤病毒研究的進(jìn)展
        1.1.1 禽呼腸孤病毒的概況
        1.1.2 禽呼腸孤病毒的基因組和蛋白質(zhì)
        1.1.3 禽呼腸孤病毒的增殖特性
        1.1.4 禽呼腸孤病毒的感染與診斷
    1.2 細(xì)胞因子的研究進(jìn)展
        1.2.1 白細(xì)胞介素1β
        1.2.2 白細(xì)胞介素6
        1.2.3 白細(xì)胞介素17
        1.2.4 白細(xì)胞介素18
        1.2.5 干擾素-γ
        1.2.6 腫瘤壞死因子-α
    1.3 雞CD4、CD8分子研究概述
        1.3.1 雞CD4分子和CD4+T細(xì)胞
        1.3.2 雞CD8分子和CD8+T細(xì)胞
    1.4 SYBR Green Ⅰ實(shí)時(shí)熒光定量PCR
    1.5 本課題研究的意義
第二章 雞IL-1β、IL-6、IL-17、IL-18、IFN-γ、TNF-α和GAPDH熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立
    摘要
    2.1 材料與方法
        2.1.1 主要儀器與試劑
        2.1.2 細(xì)胞制備與培養(yǎng)
        2.1.3 引物設(shè)計(jì)與合成
        2.1.4 細(xì)胞RNA抽提與反轉(zhuǎn)錄
        2.1.5 標(biāo)準(zhǔn)品制備
        2.1.6 反應(yīng)條件優(yōu)化
        2.1.7 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作
        2.1.8 特異性試驗(yàn)
        2.1.9 敏感性試驗(yàn)
        2.1.10 重復(fù)性試驗(yàn)
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的制備
        2.2.2 real-time PCR條件優(yōu)化
        2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作
        2.2.4 特異性試驗(yàn)結(jié)果
        2.2.5 敏感性試驗(yàn)結(jié)果
        2.2.6 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果
    2.3 討論
第三章 ARV感染對(duì)雞胚成纖維細(xì)胞6種細(xì)胞因子mRNA轉(zhuǎn)錄水平的影響
    摘要
    3.1 材料與方法
        3.1.1 病毒
        3.1.2 主要儀器與試劑
        3.1.3 細(xì)胞的制備與培養(yǎng)
        3.1.4 病毒TCID₅₀測(cè)定
        3.1.5 病毒感染方法
        3.1.6 收集細(xì)胞樣品
        3.1.7 細(xì)胞RNA抽提與反轉(zhuǎn)錄
        3.1.8 樣品測(cè)定
        3.1.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 ARV病毒結(jié)構(gòu)蛋白σ C基因的表達(dá)變化
        3.2.2 IL-1β基因的表達(dá)變化
        3.2.3 IL-6基因的表達(dá)變化
        3.2.4 IL-17基因的表達(dá)變化
        3.2.5 IL-18基因的表達(dá)變化
        3.2.6 IFN-γ基因的表達(dá)變化
        3.2.7 TNF-α基因的表達(dá)變化
        3.2.8 不同接種劑量感染CEF細(xì)胞24h后6種細(xì)胞因子的表達(dá)變化
    3.3 討論
第四章 ARV感染對(duì)SPF雞組織器官中6種細(xì)胞因子mRNA轉(zhuǎn)錄的影響
    摘要
    4.1 材料與方法
        4.1.1 主要儀器與試劑
        4.1.2 病毒
        4.1.3 SPF雞孵化
        4.1.4 SPF雞飼養(yǎng)管理
        4.1.5 SPF雞的人工感染試驗(yàn)
        4.1.6 SPF雞剖檢及組織樣品采集
        4.1.7 組織樣品RNA抽提及反轉(zhuǎn)錄
        4.1.8 Real-time PCR對(duì)試驗(yàn)樣品的測(cè)定
        4.1.9 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 感染后臨床表現(xiàn)
        4.2.2 關(guān)節(jié)中6種細(xì)胞因子的表達(dá)變化
        4.2.3 心臟中6種細(xì)胞因子的表達(dá)變化
        4.2.4 脾臟中6種細(xì)胞因子的表達(dá)變化
        4.2.5 胸腺中6種細(xì)胞因子的表達(dá)變化
        4.2.6 法氏囊中6種細(xì)胞因子的表達(dá)變化
        4.2.7 外周血中6種細(xì)胞因子的表達(dá)變化
    4.3 討論
第五章 ARV感染對(duì)SPF雞外周CD4⁺、CD8⁺T細(xì)胞量的影響
    摘要
    5.1 材料與方法
        5.1.1 儀器與主要試劑
        5.1.2 病毒
        5.1.3 SPF雞孵化
        5.1.4 SPF雞飼養(yǎng)管理
        5.1.5 SPF雞的人工感染試驗(yàn)
        5.1.6 外周血淋巴細(xì)胞樣品的制備
        5.1.7 流式細(xì)胞儀檢測(cè)分析樣品
        5.1.8 數(shù)據(jù)處理
    5.2 結(jié)果
        5.2.1 ARV感染后外周血中CD4⁺T細(xì)胞數(shù)的變化
        5.2.2 ARV感染后外周血中CD8⁺T細(xì)胞數(shù)的變化
    5.3 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷
攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況



本文編號(hào)：3892965