IFIT家族是一類主要受干擾素、病毒和脂多糖誘導(dǎo)表達的干擾素誘導(dǎo)基因。其編碼的蛋白可通過抑制翻譯起始,識別、結(jié)合并隱退特定類型的病毒核酸或蛋白以及參與調(diào)節(jié)細胞固有的和非固有的免疫反應(yīng)等方式來抵抗病毒的入侵。然而,目前該家族基因在禽類上的研究甚少。本研究首先通過分子克隆的方法獲取了雞IFIT5基因CDS區(qū)全長序列,并對其相關(guān)分子生物信息進行了分析與預(yù)測。其次,采用qRT-PCR技術(shù)構(gòu)建了雞IFIT5基因的組織表達譜,并在機體和細胞水平上檢測了雞IFIT5基因?qū)Σ煌玖π鲁且卟《径局旰筒煌T導(dǎo)刺激物的免疫應(yīng)答差異。最后,在細胞水平上采用siRNA干擾和外源過表達技術(shù)初步探究了雞MDA-5、LGP-2、MAVS和IRF-3對IFIT5基因的表達調(diào)控作用以及雞IFIT5基因?qū)RF-3和NF-κB信號通路的影響。取得的主要結(jié)果如下：(1)雞IFIT5基因CDS區(qū)全序列長1440bp,由兩個外顯子組成,共可編碼479個氨基酸。其推導(dǎo)氨基酸序列與鳥類對應(yīng)序列的相似度均不超過70%,與哺乳動物對應(yīng)序列的相似度均不超過50%。(2)雞IFIT5基因在脾、心、肺、胸腺、腎和小腸組織中具有相對較高的mRN...

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
主要符號說明
1 文獻綜述
    1.1 IFIT家族簡介
    1.2 IFIT家族基因結(jié)構(gòu)與表達研究進展
        1.2.1 IFIT家族基因結(jié)構(gòu)特征
        1.2.2 IFIT家族基因表達特性
        1.2.3 IFIT家族基因表達調(diào)控通路
    1.3 IFIT家族蛋白結(jié)構(gòu)與功能研究進展
        1.3.1 IFIT家族蛋白結(jié)構(gòu)特征
        1.3.2 IFIT家族蛋白功能研究
    1.4 IFIT5的研究進展
    1.5 研究目的及意義
2 材料與方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 試驗動物與病毒來源
        2.1.2 主要儀器設(shè)備
        2.1.3 主要試劑及耗材
        2.1.4 主要分析軟件及網(wǎng)站
    2.2 試驗方法
        2.2.1 試驗技術(shù)路線
        2.2.2 SPF雞的孵化、飼喂、攻毒和采樣
        2.2.3 cDNA模板的制備
        2.2.4 雞IFIT5基因CDS區(qū)的克隆與測序
        2.2.5 真核表達載體的構(gòu)建
        2.2.6 細胞試驗
        2.2.7 實時熒光定量PCR
        2.2.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 雞IFIT5基因CDS區(qū)的克隆與測序
    3.2 雞IFIT5基因CDS區(qū)序列分析
        3.2.1 雞IFIT5基因CDS區(qū)核苷酸序列分析
        3.2.2 雞IFIT5基因推導(dǎo)氨基酸序列分析
    3.3 雞IFIT5基因mRNA水平的組織表達譜構(gòu)建
    3.4 雞IFIT5基因在機體中對不同毒力新城疫病毒的免疫應(yīng)答差異
        3.4.1 兩攻毒組胸腺組織中IFIT5基因的表達差異
        3.4.2 兩攻毒組脾臟組織中IFIT5基因的表達差異
        3.4.3 兩攻毒組法氏囊組織中IFIT5基因的表達差異
    3.5 雞IFIT5基因在雞胚成纖維細胞中對不同刺激物的免疫應(yīng)答差異
        3.5.1 Poly I：C對雞IFIT5基因的免疫誘導(dǎo)作用
        3.5.2 Poly dA：dT對雞IFIT5基因的免疫誘導(dǎo)作用
        3.5.3 新城疫病毒Mukteswar毒株對雞IFIT5基因的免疫誘導(dǎo)作用
    3.6 雞MDA-5、LGP-2、MAVS和IRF-3基因?qū)FIT5表達水平的調(diào)控作用
        3.6.1 過表達雞MDA-5、LGP-2、MAVS和IRF-3基因?qū)FIT5免疫應(yīng)答水平的影響
        3.6.2 干擾雞MDA-5、LGP-2、MAVS和IRF-3基因表達對IFIT5免疫應(yīng)答水平的影響
    3.7 雞IFIT5蛋白的亞細胞定位
    3.8 過表達雞IFIT5基因?qū)RF-3和NF-κB應(yīng)答基因表達水平的影響
4 討論
    4.1 雞IFIT5基因CDS區(qū)序列分析
    4.2 雞IFIT5基因的組織表達分布特點
    4.3 兩攻毒組中IFIT5基因的免疫應(yīng)答差異
    4.4 雞胚成纖維細胞對不同刺激物的免疫應(yīng)答差異
    4.5 雞MDA-5、LGP-2、MAVS和IRF-3對IFIT5基因的表達調(diào)控
    4.6 雞IFIT5對IRF-3和NF-κB信號通路的影響
5 結(jié)論
參考文獻
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號：3892829