家禽養(yǎng)殖在我國(guó)具有悠久的歷史,隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)快速的發(fā)展,養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展規(guī)模與速度與日俱增,而制約其發(fā)展的主要難題是禽病,尤其是病毒性疾病。其中APV、 MDV和EDSV是三種雞的B類傳染性疾病。通常,用于檢測(cè)病原體的主要方法有病毒的分離與鑒定、血清學(xué)鑒定以及PCR方法等。本文所要研究的多重PCR方法雖與常規(guī)PCR原理相同,但可以用于多種病毒的檢測(cè),且與常規(guī)單一PCR一樣靈敏,是一種快速、有效的檢測(cè)方法,在病毒檢測(cè)領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用市場(chǎng)。 本研究利用DF-1雞胚成纖維細(xì)胞分別增殖了MDV、APV和EDSV,并利用異硫氰酸胍法提取病毒DNA,然后根據(jù)三種DNA序列分別設(shè)計(jì)了1對(duì)特異性引物,并將擴(kuò)增的片段克隆到pMD18-T載體中,以此建立了可同時(shí)檢測(cè)三種病毒的多重PCR方法,并優(yōu)化了多重PCR反應(yīng)條件,最終確定了多重PCR反應(yīng)體系為20μL:0.2μL GoTaq Flexi DNA polymerase(5U/μL),4μL5×GoTaq Flexi buffer,0.4μL dNTP (1OmM),2.4μL MgCl2(25mM), APV-F/R0.4μL,MDV-F/R0.4μL,E...

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 馬立克氏病毒檢測(cè)方法的研究進(jìn)展
        1.1 MDV的分子生物學(xué)特征
        1.2 MDV的檢測(cè)方法
    2 禽痘病毒檢測(cè)方法的研究進(jìn)展
        2.1 APV的分子生物學(xué)特征
        2.2 APV的檢測(cè)方法
    3 減蛋綜合征病毒的研究進(jìn)展
        3.1 EDSV的分子生物學(xué)特性
        3.2 EDSV的檢測(cè)方法
    4 多重PCR的發(fā)展與應(yīng)用
第二章 研究?jī)?nèi)容
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 材料
        2.2 方法
    3 結(jié)果與分析
        3.1 病毒增殖
        3.2 三種病毒的克隆
        3.3 多重PCR反應(yīng)條件優(yōu)化
        3.4 特異性檢測(cè)
        3.5 靈敏度研究
        3.6 實(shí)際樣品檢測(cè)結(jié)果
        3.7 人工糞便樣品檢測(cè)結(jié)果
        3.8 企鵝糞便樣品檢測(cè)結(jié)果
    4 討論
        4.1 多重PCR的建立
        4.2 多重PCR的可行性
        4.3 多重PCR與企鵝病原微生物的檢測(cè)
    5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3891889