本文關(guān)鍵詞：關(guān)中奶山羊乳腺中G蛋白偶聯(lián)受體30和表皮生長因子受體的表達(dá)及相關(guān)性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：已證實雌激素在哺乳動物妊娠、乳腺發(fā)育、泌乳啟動與維持等方面發(fā)揮著重要的作用,雌激素的這些效應(yīng)的發(fā)揮主要通過與其經(jīng)典的核受體及膜受體結(jié)合而實現(xiàn)。G蛋白偶聯(lián)受體30(G protein-coupled receptor 30,GPR30)作為一種新發(fā)現(xiàn)的雌激素膜受體,最先發(fā)現(xiàn)其與乳腺癌、卵巢癌等癌癥的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān),后續(xù)的研究證實它參與雌激素介導(dǎo)的諸多生殖生理功能的調(diào)節(jié)。研究發(fā)現(xiàn)GPR30在人和小鼠乳腺癌細(xì)胞中分布并促進(jìn)和增強(qiáng)乳腺癌細(xì)胞的增殖活性,而GPR30在奶山羊等奶畜的乳腺組織中的形態(tài)學(xué)和功能方面的基礎(chǔ)研究資料還未見報道。表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)可促進(jìn)乳腺細(xì)胞的增殖分化,并在GPR30介導(dǎo)雌激素的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用。因此,本試驗分別采集妊娠初期、妊娠中期、妊娠后期以及泌乳初期、盛乳期、泌乳中期和泌乳后期的關(guān)中奶山羊乳腺組織,分別運(yùn)用免疫組織化學(xué)和實時熒光定量PCR法對乳腺中GPR30與EGFR的分布和表達(dá)及相關(guān)性進(jìn)行了研究。獲得了以下研究結(jié)果:1妊娠期和泌乳期關(guān)中奶山羊乳腺中GPR30與EGFR的免疫組化定位與表達(dá)GPR30免疫反應(yīng)陽性產(chǎn)物均分布于妊娠和泌乳各階段奶山羊乳腺組織的腔上皮細(xì)胞與肌上皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞膜;除妊娠初期和泌乳后期僅少量上皮細(xì)胞表現(xiàn)GPR30陽性染色外,其他各階段的乳腺組織中幾乎全部上皮細(xì)胞均有GPR30免疫陽性產(chǎn)物分布。乳腺中GPR30的相對表達(dá)量從妊娠初期到妊娠后期逐漸升高并達(dá)峰值,泌乳期則逐漸下降至泌乳后期的最低;GPR30的相對表達(dá)量在妊娠中期后半段極顯著升高(P0.01),妊娠后期仍有升高但差異不顯著(P0.05);泌乳初期GPR30的相對表達(dá)量顯著低于妊娠后期(P0.05),而高于盛乳期(P0.05),其后表達(dá)水平極顯著下降(P0.01)并降到最低水平。EGFR免疫反應(yīng)陽性產(chǎn)物亦分布于妊娠和泌乳各階段奶山羊乳腺組織的腔上皮細(xì)胞與肌上皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞膜;泌乳中期和泌乳后期這2階段只有部分上皮細(xì)胞有EGFR免疫染色,其他各階段的乳腺組織中幾乎全部上皮細(xì)胞均有EGFR免疫陽性產(chǎn)物分布。EGFR的表達(dá)水平表現(xiàn)為妊娠期時逐漸升高并在妊娠后期時達(dá)到峰值,泌乳期逐漸下降在泌乳后期降到最低;EGFR的相對表達(dá)量在妊娠后期與泌乳前期這2個階段最高,且妊娠后期極顯著高于泌乳前期(P0.01)。GPR30與EGFR的免疫組化結(jié)果的相關(guān)系數(shù)r=0.884,呈顯著性正相關(guān),即妊娠期和泌乳期各階段GPR30和EGFR的相對表達(dá)量呈一致性的變化規(guī)律。2 GPR30 mRNA和EGFR mRNA的相對表達(dá)量檢測RT-PCR結(jié)果顯示GPR30 mRNA和EGFR mRNA的相對表達(dá)量與二者蛋白的表達(dá)趨勢相似,同樣均呈先升高再降低的表達(dá)趨勢。GPR30 mRNA的相對表達(dá)量在妊娠后期和泌乳初期時最高且均極顯著高于其他階段(P0.01);而EGFR mRNA在妊娠后期、泌乳前期和盛乳期均有高表達(dá)且極顯著高于其他階段(P0.01),其中妊娠后期表達(dá)量最高但與泌乳前期差異不顯著(P0.05),盛乳期極顯著低于泌乳前期(P0.01)。GPR30 mRNA與EGFR mRNA相對表達(dá)量的相關(guān)系數(shù)r=0.835,呈顯著性正相關(guān),即妊娠期和泌乳期各階段GPR30 mRNA與EGFR mRNA的相對表達(dá)量呈一致性的變化規(guī)律。以上結(jié)果表明,GPR30和EGFR主要分布于奶山羊乳腺的腔上皮和肌上皮細(xì)胞,其蛋白和mRNA的相對表達(dá)量隨妊娠天數(shù)逐漸升至最高、隨泌乳天數(shù)逐漸降低,且二者呈顯著正相關(guān),提示GPR30和EGFR共同參與了妊娠期和泌乳期奶山羊乳腺的生長發(fā)育和功能變化的調(diào)節(jié)。
【關(guān)鍵詞】：奶山羊乳腺 G蛋白偶聯(lián)受體30 表皮生長因子受體 免疫組織化學(xué) 實時熒光定量PCR
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S827
【目錄】：

• 摘要5-7
• abstract7-12
• 文獻(xiàn)綜述12-19
• 第一章 雌激素受體與乳腺功能調(diào)節(jié)的研究進(jìn)展12-19
• 1.1 雌激素對乳腺形態(tài)和功能的調(diào)節(jié)12-13
• 1.2 雌激素核受體在乳腺中的分布和功能13-14
• 1.2.1 乳腺中雌激素核受體ERα 和ERβ 的分布和功能13-14
• 1.2.2 乳腺中的其他雌激素核受體亞型14
• 1.3 雌激素膜受體在乳腺中的分布和功能14-16
• 1.3.1 雌激素膜受體GPR30信號通路15
• 1.3.2 GPR30在乳腺中的表達(dá)15-16
• 1.3.3 其他雌激素膜性受體16
• 1.4 其他與雌激素受體乳腺功能相關(guān)的受體16-18
• 1.4.1 EGFR在乳腺中的分布和功能16-17
• 1.4.2 其他乳腺發(fā)育調(diào)控因子17-18
• 1.5 結(jié)語18-19
• 試驗研究19-30
• 第二章 奶山羊乳腺中GPR30與EGFR的表達(dá)及相關(guān)性研究19-30
• 2.1 材料與方法19-22
• 2.1.1 試驗材料19-20
• 2.1.1.1 試驗動物19
• 2.1.1.2 主要試劑和儀器19-20
• 2.1.2 試驗方法20-22
• 2.1.2.1 取材及樣本處理20
• 2.1.2.2 免疫組化法確定卵巢中GPR30、EGFR的表達(dá)20-21
• 2.1.2.3 qRT-PCR法檢測奶山羊乳腺中GPR30 mRNA和EGFR mRNA的表達(dá)21-22
• 2.2 結(jié)果22-28
• 2.2.1 各時期奶山羊乳腺中GPR30免疫組化分布22
• 2.2.2 各時期奶山羊乳腺中EGFR免疫組化分布22-24
• 2.2.3 各時期奶山羊乳腺中GPR30和EGFR相對表達(dá)量分析24-25
• 2.2.4 各時期奶山羊乳腺中GPR30 mRNA和EGFR mRNA的表達(dá)量分析25-28
• 2.2.4.1 熔解曲線分析結(jié)果25-26
• 2.2.4.2 各時期奶山羊乳腺中GPR30 mRNA和EGFR mRNA的相對表達(dá)量26-28
• 2.3 討論28-30
• 結(jié)論30-31
• 參考文獻(xiàn)31-37
• 致謝37-38
• 作者簡介38

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本文編號：389182