發(fā)布時(shí)間：2024-01-19 14:49

　　腸炎沙門(mén)氏菌{Salmonella enteritidis, SE)是一大類(lèi)革蘭氏陰性(G-)無(wú)芽孢直桿菌,有鞭毛,能運(yùn)動(dòng),為重要的人畜共患病原菌。腸炎沙門(mén)氏菌不僅使養(yǎng)禽業(yè)蒙受?chē)?yán)重的經(jīng)濟(jì)損失,還是食源性重要病原菌。誤食腸炎沙門(mén)氏菌感染禽蛋及禽肉制品能夠引發(fā)人類(lèi)的食物中毒,因此其在公共衛(wèi)生學(xué)上也具有重要意義。腸炎沙門(mén)氏菌的致病性與其多種毒力因子關(guān)系緊密。通過(guò)不同的致病機(jī)制,腸炎沙門(mén)氏菌的毒力因子能夠共同作用于宿主,造成宿主機(jī)體發(fā)病甚至死亡。在這腸炎沙門(mén)氏菌的多種毒力因子之中,鞭毛無(wú)疑是不容忽視的一種。沙門(mén)氏菌鞭毛作為沙門(mén)氏菌的主要運(yùn)動(dòng)器官,功能是輔助其完成有目的性的運(yùn)動(dòng),典型如化學(xué)趨向性運(yùn)動(dòng)。但近十年來(lái),沙門(mén)氏菌鞭毛與細(xì)菌生物被膜的形成及在誘導(dǎo)宿主機(jī)體發(fā)生免疫應(yīng)答及炎癥反應(yīng),尤其是其在致病過(guò)程中對(duì)宿主(小腸腸道粘膜等)的粘附定殖作用已逐漸引起了學(xué)術(shù)界的高度關(guān)注。本文以沙門(mén)氏菌鞭毛素基因fliC為研究對(duì)象,構(gòu)建腸炎沙門(mén)氏菌野生株的鞭毛素fliC基因缺失株及在SEF14菌毛主要亞單位sefA缺失株的基礎(chǔ)上構(gòu)建菌毛鞭毛缺失株,繼而通過(guò)體外細(xì)胞試驗(yàn)分析比較沙門(mén)氏菌鞭毛在腸炎沙門(mén)氏菌感染過(guò)程中侵襲...

【文章頁(yè)數(shù)】：61 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
目錄
符號(hào)說(shuō)明
文獻(xiàn)綜述
    腸炎沙門(mén)氏菌感染現(xiàn)狀
    沙門(mén)氏菌鞭毛結(jié)構(gòu)及功能
    沙門(mén)氏菌鞭毛隸屬于粘附素大類(lèi)
    鞭毛運(yùn)動(dòng)性與毒力
    鞭毛與細(xì)菌的生物膜形成
    鞭毛與細(xì)菌的粘附和侵襲
    Ⅲ型分泌系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和功能
    沙門(mén)菌菌毛
    沙門(mén)菌毛的分類(lèi)
    參考文獻(xiàn)
研究一 腸炎沙門(mén)氏菌鞭毛主要編碼基因fliC缺失突變株及相應(yīng)回補(bǔ)株的構(gòu)建
    摘要
    Abstract
    1 材料
        1.1 菌株、抗體及質(zhì)粒
        1.2 培養(yǎng)基和主要試劑
        1.3 主要儀器
    2 方法
        2.1 fliC基因缺失引物的設(shè)計(jì)
        2.2 融合PCR產(chǎn)物的制備和純化
        2.3 感受態(tài)細(xì)胞的制備及轉(zhuǎn)化
            2.3.1 感受態(tài)細(xì)胞的制備
            2.3.2 質(zhì)粒pKD46的轉(zhuǎn)化
            2.3.3 Red重組的誘導(dǎo)和感受態(tài)細(xì)胞的制備
        2.4 電轉(zhuǎn)化
        2.5 消除質(zhì)粒pKD46
        2.6 一次同源重組菌ΔfliC::Cat的PCR鑒定
        2.7 FLP位點(diǎn)專(zhuān)一性重組
        2.8 第二次重組菌XΔfliC的鑒定
        2.9 互補(bǔ)株的構(gòu)建
        2.10 半固體運(yùn)動(dòng)試驗(yàn)
        2.11 負(fù)染和透射電鏡(Transmission Electron Microscopy,TEM)觀(guān)察
        2.12 玻板凝集試驗(yàn)
    3 結(jié)果
        3.1 融合PCR產(chǎn)物的制備
        3.2 同源重組菌的PCR鑒定
        3.4 鑒定引物P3、P4擴(kuò)增ΧΔ∥fliC菌株的序列分析
        3.5 XΔfliC 缺失株的表型分析
    4 討論
    參考文獻(xiàn)
研究二 鞭毛對(duì)腸炎沙門(mén)氏菌生物膜形成的影響分析
    摘要
    Abstract
    1 材料
        1.1 菌株
        1.2 培養(yǎng)基和主要試劑
        1.3 主要儀器
    2 方法
        2.1 野生株、突變株與相應(yīng)回補(bǔ)株生長(zhǎng)曲線(xiàn)測(cè)定
        2.2 結(jié)晶紫染色法定性測(cè)定野生株、缺失株與相應(yīng)回補(bǔ)株生物膜形成能力
        2.3 結(jié)晶紫染色法定量測(cè)定野生株、缺失株與相應(yīng)回補(bǔ)株生物膜形成
    3 結(jié)果
        3.1 野生株、突變株與相應(yīng)回補(bǔ)株生長(zhǎng)曲線(xiàn)測(cè)定
        3.2 野生株、缺失株與相應(yīng)回補(bǔ)株生物膜形成能力定性分析
        3.3 野生株、缺失株與相應(yīng)回補(bǔ)株生物膜形成能力定量分析
    4 討論
    參考文獻(xiàn)
研究三 腸炎沙門(mén)氏菌鞭毛與腸上皮細(xì)胞Caco-2和IPEC-J2細(xì)胞的體外黏附作用
    摘要
    Abstract
    1 材料
        1.1 菌株及細(xì)胞系
        1.2 培養(yǎng)基和主要試劑
        1.3 主要儀器設(shè)備
    2 方法
        2.1 菌株的準(zhǔn)備
        2.2 Caco-2細(xì)胞粘附試驗(yàn)
            2.2.1 Caco-2細(xì)胞的培養(yǎng)與傳代
            2.2.2 Caco-2細(xì)胞粘附試驗(yàn)
        2.3 IPEC-2細(xì)胞粘附試驗(yàn)
        2.4 數(shù)據(jù)處理
    3 結(jié)果
        3.1 Caco-2細(xì)胞粘附試驗(yàn)
        3.2 IPEC-2細(xì)胞粘附試驗(yàn)
    4 討論
    參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)
致謝



本文編號(hào)：3879990