網(wǎng)格蛋白(Clathrin)不僅是通過囊泡運輸來介導細胞內(nèi)吞作用的胞質(zhì)蛋白,而且在穩(wěn)定微管蛋白和染色體排列中也具有重要作用。Clathrin是由三條重鏈和三條輕鏈組成的蛋白。網(wǎng)格重鏈蛋白1(Clathrin heavy chain 1,CLTC)是Clathrin其中的一條的重鏈,每條鏈的N-末端結(jié)構(gòu)域可以與有絲分裂紡錘體結(jié)合。在本實驗中,我們研究了CLTC在綿羊卵母細胞減數(shù)分裂成熟和早期胚胎發(fā)育中的功能。蛋白質(zhì)免疫印跡表明,在綿羊卵母細胞成熟中CLTC蛋白維持高水平表達。盡管CLTC在生發(fā)泡(Germinal vesicle,GV)和生發(fā)泡破裂(Germinal vesicle breakdown,GVBD)階段的細胞質(zhì)中沒有特異性定位,但CLTC在卵母細胞的中期Ⅰ(Metaphase Ⅰ,MⅠ)和中期Ⅱ(Metaphase Ⅱ,MⅡ)階段定位于紡錘體區(qū)域。在綿羊卵母細胞成熟過程中,使用taxol、nocodazole和冷處理(cold treatment)來研究卵母細胞中CLTC和β-微管蛋白(β-tubulin,TUBB)之間的關(guān)系。我們發(fā)現(xiàn)藥物和cold處理雖然沒有影響CLTC...

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【學位級別】：碩士

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摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一章 文獻綜述 卵母細胞減數(shù)分裂紡錘體組裝機制的研究進展
    1 卵母細胞減數(shù)分裂紡錘體微管起源
        1.1 RanGTP途徑
        1.2 CPC途徑
        1.3 Augmin途徑
        1.4 其他成核途徑
    2 卵母細胞減數(shù)分裂紡錘體微管組裝
        2.1 紡錘體微管構(gòu)成
        2.2 紡錘體雙極化
        2.3 紡錘體極的形成
    3 局部mRNA的翻譯在紡錘體形成中的作用
    4 展望
第二章 實驗研究 Clathrin Heavy Chain1在綿羊卵母細胞減數(shù)分裂成熟及早期胚胎發(fā)育過程中的作用
    1 引言
    2 實驗材料
        2.1 實驗動物
        2.2 主要藥品與試劑
        2.3 抗體
        2.4 主要儀器設(shè)備
        2.5 主要實驗耗材
    3 實驗方法
        3.1 綿羊卵母細胞的采集
        3.2 綿羊卵丘細胞的去除
        3.3 綿羊卵母細胞的孤雌激活
        3.4 早期胚胎的培養(yǎng)
        3.5 藥物處理
        3.6 冷處理(cold treatment)
        3.7 CLTC morpholino(MO)顯微注射
        3.8 免疫熒光染色
        3.9 免疫印跡(Western Blot)
        3.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    4 結(jié)果
        4.1 CLTC在綿羊卵母細胞減數(shù)分裂成熟和早期胚胎發(fā)育過程的表達與定位
            4.1.1 CLTC在綿羊卵母細胞減數(shù)分裂成熟中的表達
            4.1.2 CLTC在綿羊卵母細胞減數(shù)分裂成熟中的定位
            4.1.3 CLTC在綿羊早期胚胎發(fā)育過程中的表達定位
        4.2 使用藥物破壞紡錘體結(jié)構(gòu)后CLTC的定位和表達
            4.2.1 Nocodazole處理綿羊卵母細胞后對CLTC亞細胞定位和表達量的影響
            4.2.2 Taxol處理綿羊卵母細胞后對CLTC亞細胞定位和表達量的影響
        4.3 冷處理后和恢復后CLTC的表達和定位
        4.4 CLTC的敲減對綿羊卵母細胞減數(shù)分裂的影響
            4.4.1 CLTC MO的敲減效率驗證
            4.4.2 CLTC MO敲減干擾了綿羊卵母細胞成熟
            4.4.3 CLTC MO敲減后導致卵母細胞紡錘體組裝和染色體排列異常
        4.5 CLTC MO敲減干擾了綿羊早期胚胎發(fā)育
    5 討論
    6 結(jié)論
參考文獻
附錄
致謝



本文編號：3875906