毛乳頭(dermal papilla,DP)控制著毛囊(hair follicle)的再生和大小,被認為是毛囊生長和毛囊周期的控制中樞,使其成為研究毛囊形態(tài)發(fā)生發(fā)育機制的優(yōu)良模型。但是體外培養(yǎng)的毛乳頭細胞貼壁及遷出時間較長且效率較低影響實驗效率,使其作為研究毛囊周期機制的試驗材料受到限制。本試驗旨在探索培養(yǎng)毛乳頭細胞最適培養(yǎng)基及最適血清添加比例,以此來提高其培養(yǎng)效率。結果如下:(1)通過顯微解剖法剝離陜北白絨山羊生長期初級毛囊毛乳頭并進行體外原代培養(yǎng),利用細胞免疫熒光染色的方法檢測毛乳頭細胞中CD133、α-平滑肌激動蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA),結果證實所培養(yǎng)的細胞為毛乳頭細胞。在常規(guī)培養(yǎng)DMEM/F12(dulbecco’s modified eagle media/nutrient mixture F-12)(1∶1)與DMEM/F-12 GlutaMAX、減血清培養(yǎng)基Advanced DMEM/F-12與Advanced RPMI 1640(roswell park memorial institute(RPMI)1640),四種培養(yǎng)基加入不同...

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 絨山羊毛囊毛乳頭細胞的培養(yǎng)與誘導能力分子調控
    1.1 引言
    1.2 絨山羊毛囊毛乳頭細胞培養(yǎng)
        1.2.1 絨山羊毛囊類型與結構
        1.2.2 毛囊周期性變化
        1.2.3 毛乳頭細胞分離培養(yǎng)
        1.2.4 細胞培養(yǎng)的研究進展
    1.3 毛乳頭細胞誘導毛囊周期性變化的分子調控
        1.3.1 調控毛囊形態(tài)發(fā)育的信號通路
        1.3.2 Wnt/β-catenin信號通路
        1.3.3 糖原合成酶激酶-3β抑制劑(BIO)的功能作用
    1.4 研究的目的與意義
第二章 絨山羊初級毛囊毛乳頭細胞減血清培養(yǎng)條件的建立
    2.1 材料
        2.1.1 主要試劑
    2.2 試驗方法
        2.2.1 樣品的采集和預處理
        2.2.2 毛乳頭細胞的剝離與培養(yǎng)
        2.2.3 毛乳頭細胞形態(tài)學觀察與免疫熒光鑒定
        2.2.4 毛乳頭細胞生長曲線的繪制
        2.2.5 MTT法檢測毛乳頭細胞活力
        2.2.6 測定毛乳頭細胞的AKP活性
        2.2.7 數據處理
    2.3 結果與分析
        2.3.1 毛乳頭細胞體外培養(yǎng)
        2.3.2 毛乳頭細胞的免疫熒光鑒定
        2.3.3 添加10%血清條件下四種培養(yǎng)基的培養(yǎng)效果
        2.3.4 四種培養(yǎng)基的最適血清添加比例
        2.3.5 添加適宜血清濃度四種培養(yǎng)基的培養(yǎng)效果
    2.4 討論
        2.4.1 陜北白絨山羊的初級毛囊毛乳頭細胞的分離與鑒定
        2.4.2 最適培養(yǎng)基與最適血清添加比例的探索
    2.5 小結
第三章 糖原合成酶激酶-3β抑制劑(BIO)對毛乳頭誘導能力的影響
    3.1 材料
        3.1.1 主要試劑及配制
    3.2 試驗方法
        3.2.1 樣品的采集和預處理
        3.2.2 毛乳頭細胞的剝離、培養(yǎng)
        3.2.3 毛乳頭細胞形態(tài)學觀察與免疫熒光鑒定
        3.2.4 CCK8法檢測毛乳頭細胞活力
        3.2.5 測定毛乳頭細胞的AKP活性
        3.2.6 實時熒光定量PCR
        3.2.7 蛋白免疫印跡
        3.2.8 數據處理
    3.3 結果與分析
        3.3.1 毛乳頭細胞免疫熒光鑒定
        3.3.2 添加不同濃度BIO對毛乳頭細胞增殖能力的影響
        3.3.3 添加不同濃度BIO毛乳頭細胞誘導能力的影響
        3.3.4 添加適宜濃度的BIO對毛乳頭細胞誘導能力相關基因mRNA表達的影響
        3.3.5 添加適宜濃度的BIO對毛乳頭細胞誘導能力相關基因蛋白的影響
    3.4 討論
        3.4.1 毛乳頭細胞的分離鑒定
        3.4.2 BIO對毛乳頭細胞誘導能力的影響
    3.5 小結
第四章 總結
    4.1 結論
    4.2 創(chuàng)新點
    4.3 下一步研究建議
參考文獻
附錄
致謝
作者簡介



本文編號：3872017