發(fā)布時間：2023-12-08 20:02

　　PRL是禽類就巢發(fā)生和維持的關(guān)鍵激素,F蛋白是新城疫病毒的主要宿主免疫保護性抗原。主動免疫雞催乳素(Prolactin, PRL)和新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV) F基因既可改變雌禽的繁殖性能,提高產(chǎn)蛋量,又可改善免疫性能。本研究應(yīng)用基因克隆、細胞培養(yǎng)、基因免疫、蛋白印跡等技術(shù),構(gòu)建雞催乳素和新城疫病毒(NDV) FDNA重組表達質(zhì)粒,為研制雞催乳素和新城疫基因疫苗奠定了基礎(chǔ)。 1、雞PRL和NDV F基因的原核表達與免疫特性鑒定 將雞催乳素和NDV F基因克隆于pGEX-6P-1載體中,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21用0.5mM IPTG誘導表達。SDS-PAGE電泳結(jié)果分析PRL、F基因獲得高量表達,大小分別約為54kDa和86kDa,與預(yù)期結(jié)果相符,表達產(chǎn)物以融合蛋白包涵體的形式出現(xiàn)在沉淀中。Western blot結(jié)果表明,融合表達的GST-PRL和GST-F蛋白能與小鼠血清發(fā)生特異性反應(yīng),證明其抗原性良好。經(jīng)包涵體洗液裂解后得到純化蛋白GST-PRL和GST-F分別免疫ICR小鼠,獲得多克隆抗體,從而為PRL和F蛋白功能研究奠定了基礎(chǔ)。 2、共表...

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 雞催乳素、新城疫和DNA疫苗的研究進展
    1.1 雞催乳素的研究概況
    1.2 雞新城疫的研究概況
    1.3 DNA疫苗研究進展
    參考文獻
第二章 雞PRL和NDV F基因的原核表達與免疫特性鑒定
    1 材料與方法
        1.1 載體和菌株
        1.2 試劑和酶類
        1.3 雞PRL和新城疫F基因片段引物的設(shè)計與合成
        1.4 PRL和NDV F基因PCR擴增及純化
        1.5 PRL、NDV F原核表達重組質(zhì)粒的構(gòu)建、表達及重組蛋白的純化
        1.6 PRL和NDV F蛋白多克隆抗體制備
        1.7 Western blot
    2. 結(jié)果
        2.1 PRL和NDV F基因片段重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2 PRL和NDV F重組蛋白表達與Western blot鑒定
    3 討論
    參考文獻
第三章 共表達PRL和NDV F基因的真核質(zhì)粒構(gòu)建鑒定
    1 材料
        1.1 質(zhì)粒、菌株
        1.2 試劑
    2 方法
        2.1 PRL及NDV F基因的擴增
        2.2 PRL和NDV F基因的回收純化
        2.3 重組真核質(zhì)粒構(gòu)建
        2.4 重組質(zhì)粒的真核表達鑒定
    3 結(jié)果
        3.1 重組真核質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
        3.2 Western blot鑒定蛋白的表達
    4 討論
    參考文獻
第四章 體外表達PRL和NDV F蛋白真核質(zhì)粒對雞生產(chǎn)性能和免疫特性研究
    1 材料
        1.1 質(zhì)粒與病毒
        1.2 主要試劑
    2 方法
        2.1 質(zhì)粒的大量制備
        2.2 動物分組與免疫實驗
        2.3 雞產(chǎn)蛋性能和血清中PRL含量測定
        2.4 ELISA抗體檢測
        2.5 淋巴細胞增殖實驗
        2.6 細胞因子測定
        2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    3 結(jié)果
        3.1 免疫后雞就巢概況和產(chǎn)蛋性能
        3.2 免疫后雞血清中PRL變化規(guī)律
        3.3 體液免疫應(yīng)答
        3.4 細胞免疫應(yīng)答
    4 討論
    參考文獻
全文總結(jié)
致謝



本文編號：3871061