本文關(guān)鍵詞：EDN3在不同毛色綿羊皮膚中的表達(dá)及其對色素細(xì)胞影響的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：哺乳動物體表由皮膚及被毛覆蓋,其中毛色的深淺變化及顏色差異受到外界環(huán)境,營養(yǎng)攝入,基因遺傳等的影響,但黑色素合成的多少直接決定毛發(fā)的顏色。在色素相關(guān)研究中發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮素(Endothelin, EDN)作為一類由角化細(xì)胞合成的旁分泌因子,對未成熟的黑色素細(xì)胞主要發(fā)揮促分化并影響遷移的作用,對成熟的黑色素細(xì)胞則以刺激增殖分裂為主。盡管如此,對綿羊被毛黑色素合成的影響尚未見報(bào)道,對不同色素細(xì)胞的影響仍有待研究。本研究以不同毛色綿羊及不同的黑色素細(xì)胞為研究對象,運(yùn)用多種生物學(xué)方法探索EDN3在綿羊不同毛色形成過程中的作用機(jī)制及其對色素生成的調(diào)控作用。(1)實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)分析在不同毛色綿羊皮膚中EDN3的相對表達(dá)量,結(jié)果顯示：全白綿羊皮膚中EDN3的表達(dá)量是黑色綿羊皮膚(黑白花斑綿羊)的4.8倍,是全黑綿羊皮膚表達(dá)量的5.5倍;綿羊白色皮膚(黑白花斑綿羊)EDN3的表達(dá)量是黑色皮膚(黑白花斑綿羊)的3.8倍,是全黑綿羊皮膚表達(dá)量的4.3倍。數(shù)據(jù)分析結(jié)果顯示EDN3 mRNA在不同毛色綿羊皮膚中的表達(dá)差異極顯著(P0.01)。(2)通過ELISA檢測EDN3在不同毛色綿羊皮膚中的蛋白表達(dá)量,結(jié)果顯示：全白綿羊皮膚中EDN3的表達(dá)量是黑色皮膚(黑白花斑綿羊)的4.5倍,是全黑綿羊皮膚表達(dá)量的5.1倍；白色皮膚(黑白花斑綿羊)EDN3的表達(dá)量是黑色皮膚(黑白花斑綿羊)的3.3倍,是全黑綿羊皮膚的3.7倍。EDN3在白色綿羊皮膚與黑色綿羊皮膚的蛋白表達(dá)差異極顯著(P0.01)。(3)EDN3蛋白定位表達(dá)的結(jié)果可知,不同毛色綿羊皮膚的毛囊中有EDN3的正常表達(dá),根據(jù)陽性反應(yīng)顏色的深淺可判斷EDN3主要表達(dá)部位為毛基質(zhì),內(nèi)毛根鞘和外毛根鞘等處。(4)運(yùn)用MTT法檢測不同來源的黑色素細(xì)胞在不同濃度EDN3(10-10mol/L、10-9 mol/L、10-8mol/L、10-7 mol/L、10-6mol/L)影響下的增殖率。結(jié)果顯示兩種來源的黑色素細(xì)胞在EDN3的刺激下增值率均有所提高,但以EDN3濃度為10-8mol/L時細(xì)胞增殖率的提高達(dá)到了頂峰,隨后濃度過高時(10-7,10-6)反而會對增殖率的提升產(chǎn)生了部分的抑制作用。比較兩種細(xì)胞的增值率顯示白色皮膚來源的黑色素細(xì)胞在EDN3為10-8mol/L時的增殖率明顯高于黑色皮膚來源的黑色素細(xì)胞。(5)實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)檢測EDN3在10-8mol/L濃度時EDNRB、NRas、TYR基因mRNA相對表達(dá)量的變化。結(jié)果顯示：添加EDN3的白色來源細(xì)胞內(nèi)EDNRB mRNA的相對表達(dá)量是正常細(xì)胞組的1.7992倍,NRas是正常細(xì)胞組的1.8536倍差異極顯著(P0.01),但TYR的表達(dá)量與正常組細(xì)胞相比幾乎未發(fā)生變化;添加EDN3的黑色來源細(xì)胞內(nèi)EDNRB mRNA的相對表達(dá)量是正常細(xì)胞組的2.2512倍,NRas是正常細(xì)胞組的1.3859倍,TYR是正常細(xì)胞組的15.5710倍差異極顯著(P0.01)。(6) Western Blot檢測EDNRB、NRas、TYR蛋白表達(dá)的結(jié)果顯示：添加EDN3的白色來源細(xì)胞內(nèi)EDNRB蛋白表達(dá)量是正常細(xì)胞組的3.0827倍差異極顯著(P0.01),NRas是正常細(xì)胞組的1.2936倍差異顯著(P0.05), TYR蛋白表達(dá)量未發(fā)生明顯變化;添加EDN3的黑色來源細(xì)胞內(nèi)EDNRB蛋白表達(dá)量是正常細(xì)胞組的3.9800倍差異極顯著(P0.01), NRas是正常細(xì)胞組的1.3658倍差異顯著(P0.05), TYR是正常細(xì)胞組的1.8498倍差異顯著(P0.05)。上述結(jié)果顯示：EDN3在不同毛色綿羊皮膚中均可正常表達(dá),且表達(dá)量存在顯著的差異。EDN3促進(jìn)白色來源的黑色素細(xì)胞增殖但對色素合成的限速酶TYR未產(chǎn)生促進(jìn)作用；EDN3促進(jìn)黑色來源的黑色素細(xì)胞增殖并可能促進(jìn)黑色素生成。
【關(guān)鍵詞】：EDN3 綿羊 黑色素細(xì)胞 黑色素
【學(xué)位授予單位】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S826
【目錄】：

• 摘要7-9
• 前言9-11
• 文獻(xiàn)綜述11-16
• 1 色素研究現(xiàn)狀11-13
• 1.1 黑色素細(xì)胞的發(fā)育11-12
• 1.2 黑色素的合成12-13
• 1.3 黑色素生成的調(diào)節(jié)13
• 2 EDN3研究進(jìn)展13-15
• 2.1 EDN3主要功能及作用13-14
• 2.2 EDN3與色素沉著14-15
• 3 本研究的意義和內(nèi)容15-16
• 實(shí)驗(yàn)一 EDN3在不同毛色綿羊皮膚的表達(dá)與定位16-25
• 1 實(shí)驗(yàn)材料16
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動物與材料16
• 1.2 主要儀器與試劑16
• 2 實(shí)驗(yàn)方法16-20
• 2.1 RNA的提取16-17
• 2.2 cDNA的合成17
• 2.3 設(shè)計(jì)引物及PCR擴(kuò)增17-18
• 2.4 qRT-PCR的擴(kuò)增18-19
• 2.5 總蛋白的提取19
• 2.6 ELISA蛋白含量測定19
• 2.7 免疫組織化學(xué)19-20
• 3 結(jié)果20-25
• 3.1 PCR擴(kuò)增電泳結(jié)果20-21
• 3.2 EDN3 mRNA的表達(dá)差異21-22
• 3.3 ELISA試驗(yàn)結(jié)果22
• 3.4 免疫組化結(jié)果22-25
• 實(shí)驗(yàn)二 EDN3對不同毛色綿羊黑色素細(xì)胞的影響25-35
• 1 實(shí)驗(yàn)材料與主要試劑25-26
• 1.1 材料25
• 1.2 主要儀器25
• 1.3 實(shí)驗(yàn)試劑25-26
• 2 實(shí)驗(yàn)方法26-29
• 2.1 黑色素細(xì)胞的復(fù)蘇與傳代26
• 2.2 黑色素細(xì)胞活力的測定26
• 2.3 Real-time PCR檢測26-27
• 2.4 提取細(xì)胞總蛋白27
• 2.5 Western Blot27-28
• 2.6 Western Blot結(jié)果分析28-29
• 3 結(jié)果29-35
• 3.1 黑色素細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察29
• 3.2 EDN3對細(xì)胞增殖率的影響29
• 3.3 EDNRB、NRas及TYR mRNA的變化29-33
• 3.4 Western blotting實(shí)驗(yàn)結(jié)果33-35
• 討論35-38
• 1 EDN3在不同毛色綿羊皮膚的表達(dá)與定位35-36
• 2 EDN3對不同毛色綿羊黑色素細(xì)胞的影響36-38
• 全文結(jié)論及創(chuàng)新點(diǎn)38-39
• 參考文獻(xiàn)39-43
• Abstract43-45
• 附錄45-47
• 致謝47

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李亞楠;EDN3在不同毛色綿羊皮膚中的表達(dá)及其對色素細(xì)胞影響的研究[D];山西農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

  本文關(guān)鍵詞：EDN3在不同毛色綿羊皮膚中的表達(dá)及其對色素細(xì)胞影響的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：386941