為了提高H5N8亞型禽流感病毒核酸檢測結果的準確性,試驗按照國家標準GB/T 19438.1—2004和GB/T 19438.2—2004選出禽流感病毒H5N8亞型毒株,根據(jù)HA和NA基因全長序列分別設計特異性引物進行擴增;利用基因克隆和體外轉錄技術制備出H5N8亞型禽流感病毒檢測用核酸標準物質,并測定其濃度和純度;采用實時熒光定量RT-PCR方法對體外轉錄產(chǎn)物HA-cRNA、NA-cRNA進行驗證并繪制標準曲線;檢測HA-cRNA、NA-cRNA的均勻性和穩(wěn)定性,并通過協(xié)作標定方式對其含量及不確定度進行分析。結果表明:H5N8亞型禽流感病毒HA和NA基因片段大小為1 704 bp和1 413 bp,與預期大小一致。H5N8亞型禽流感病毒核酸標準物質HA基因的OD₂₆₀/OD₂₈₀值為1.93,濃度為11.32 ng/μL;NA基因的OD₂₆₀/OD₂₈₀值為2.06,濃度為14.24 ng/μL。體外轉錄產(chǎn)物HA-cRNA、NA-cRNA均有典型的擴增曲線,HA基因標準曲線回歸方程為y=-3.59...

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料
    1.1 毒株
    1.2 主要試劑與菌株
2 方法
    2.1 毒株選定與引物設計
    2.2 HA和NA基因擴增和克隆
    2.3 HA和NA基因體外轉錄
    2.4 體外轉錄產(chǎn)物濃度及純度的測定
    2.5 體外轉錄產(chǎn)物驗證
    2.6 均勻性試驗
    2.7 穩(wěn)定性試驗
    2.8 聯(lián)合標定與不確定度分析
3 結果與分析
    3.1 HA和NA基因擴增
    3.2 重組質粒擴增
    3.3 體外轉錄產(chǎn)物濃度、純度測定
    3.4 體外轉錄產(chǎn)物驗證
    3.5 均勻性試驗
    3.6 穩(wěn)定性試驗
    3.7 聯(lián)合標定和不確定度分析
4 討論與結論



本文編號：3868389