本研究旨在對進口胎牛血清中的牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)進行分離及鑒定。利用BVDV抗原和抗體檢測試劑盒檢測,提取胎牛血清中的病毒RNA,用5′-UTR巢式PCR進行擴增,PCR擴增產(chǎn)物連接pMD19-T進行測序分析。胎牛血清樣品接種MDBK細胞,進行細胞傳代培養(yǎng),通過細胞分離培養(yǎng)、直接免疫熒光抗體檢測對實驗室進口胎牛血清樣品進行病毒分離及鑒定,應(yīng)用DNAStar對BVDV 5′-UTR、N^pro與GenBank中公布的瘟病毒參考株進行多序列比對,采用Mega 6.0進行遺傳進化分析。同時通過包被脫脂奶粉進行間接ELISA檢測其中的BVDV抗體。結(jié)果顯示,胎牛血清中BVDV抗原和抗體均為陽性,并且從胎牛血清中成功分離到一株新的牛源BVDV,命名為BVDV-GC株,該病毒株在MDBK細胞上進行增殖培養(yǎng)時未能引起細胞病變;5′-UTR與N^pro PCR擴增為陽性,擴增產(chǎn)物大小均與預(yù)期相符;直接免疫熒光檢測熒光信號為陽性;病毒滴度為10^-3.6TCID₅₀/0.1 mL;遺傳進化分析表明,該分離株與USM...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 細胞
        1.1.2 主要試劑及儀器
    1.2 方法
        1.2.1 引物設(shè)計及合成
        1.2.2 抗原抗體ELISA檢測和反轉(zhuǎn)錄PCR
        1.2.3 病毒的分離
        1.2.4 抗原性檢測
        1.2.5 病毒TCID50測定
        1.2.6 遺傳進化分析
        1.2.7 間接ELISA檢測脫脂奶粉中BVDV抗體
2 結(jié) 果
    2.1 抗原抗體ELISA檢測和反轉(zhuǎn)錄PCR檢測結(jié)果
    2.2 抗原檢測
    2.3 病毒TCID50測定
    2.4 遺傳進化分析
    2.5 間接ELISA結(jié)果
3 討 論
4 結(jié) 論



本文編號：3863187