本研究旨在對(duì)進(jìn)口胎牛血清中的牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)進(jìn)行分離及鑒定。利用BVDV抗原和抗體檢測(cè)試劑盒檢測(cè),提取胎牛血清中的病毒RNA,用5′-UTR巢式PCR進(jìn)行擴(kuò)增,PCR擴(kuò)增產(chǎn)物連接pMD19-T進(jìn)行測(cè)序分析。胎牛血清樣品接種MDBK細(xì)胞,進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng),通過細(xì)胞分離培養(yǎng)、直接免疫熒光抗體檢測(cè)對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)口胎牛血清樣品進(jìn)行病毒分離及鑒定,應(yīng)用DNAStar對(duì)BVDV 5′-UTR、N^pro與GenBank中公布的瘟病毒參考株進(jìn)行多序列比對(duì),采用Mega 6.0進(jìn)行遺傳進(jìn)化分析。同時(shí)通過包被脫脂奶粉進(jìn)行間接ELISA檢測(cè)其中的BVDV抗體。結(jié)果顯示,胎牛血清中BVDV抗原和抗體均為陽(yáng)性,并且從胎牛血清中成功分離到一株新的牛源BVDV,命名為BVDV-GC株,該病毒株在MDBK細(xì)胞上進(jìn)行增殖培養(yǎng)時(shí)未能引起細(xì)胞病變;5′-UTR與N^pro PCR擴(kuò)增為陽(yáng)性,擴(kuò)增產(chǎn)物大小均與預(yù)期相符;直接免疫熒光檢測(cè)熒光信號(hào)為陽(yáng)性;病毒滴度為10^-3.6TCID₅₀/0.1 mL;遺傳進(jìn)化分析表明,該分離株與USM...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 細(xì)胞
        1.1.2 主要試劑及儀器
    1.2 方法
        1.2.1 引物設(shè)計(jì)及合成
        1.2.2 抗原抗體ELISA檢測(cè)和反轉(zhuǎn)錄PCR
        1.2.3 病毒的分離
        1.2.4 抗原性檢測(cè)
        1.2.5 病毒TCID50測(cè)定
        1.2.6 遺傳進(jìn)化分析
        1.2.7 間接ELISA檢測(cè)脫脂奶粉中BVDV抗體
2 結(jié) 果
    2.1 抗原抗體ELISA檢測(cè)和反轉(zhuǎn)錄PCR檢測(cè)結(jié)果
    2.2 抗原檢測(cè)
    2.3 病毒TCID50測(cè)定
    2.4 遺傳進(jìn)化分析
    2.5 間接ELISA結(jié)果
3 討 論
4 結(jié) 論



本文編號(hào)：3863187