雞傳染性支氣管炎(IB)是一種由γ冠狀病毒類的雞傳染性支氣管炎病毒(IBV)引起的具有高度接觸性傳染性疾病。IB呈世界范圍內(nèi)流行,進(jìn)化過程中易變異,特別是RNA依賴的RNA聚合酶的特殊復(fù)制機(jī)制,使得IBV基因組發(fā)生高頻率的堿基缺失、插入以及野毒株之間、疫苗毒株與野毒株之間的重組事件,從而產(chǎn)生多種血清型或變異新型,不同病毒株之間交叉保護(hù)力弱,給世界養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。IB的防控主要依賴使用滅活疫苗和弱毒疫苗,但常常還有免疫失敗的報(bào)道。因此急需研制新型疫苗以及對(duì)已有的疫苗進(jìn)行免疫策略的優(yōu)化,達(dá)到增強(qiáng)疫苗抗病毒效應(yīng)的目的。采用本課題組構(gòu)建的重組質(zhì)粒按常規(guī)方法進(jìn)行制備并制成DNA疫苗。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中設(shè)計(jì)7個(gè)組即pVAX1-Ub-linker-N + pVAX1-Ub-linker-N免疫組、pVAX1-Ub-linker-S1 +pVAX1-Ub-linker-S 免疫組、pVAX1-Ub-linker-N-S1+pVAX1-Ub-linker-N-S1 免疫組、pVAX1-Ub-linker-N-S1 + inactivated vaccine免疫組、H120 + pVAX1-Ub-l...

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 雞傳染性支氣管炎病毒及其防控研究進(jìn)展
    1.1 IBV的早期發(fā)現(xiàn)與特性
    1.2 IBV結(jié)構(gòu)蛋白及其生物學(xué)功能
        1.2.1 纖突蛋白
        1.2.2 膜蛋白
        1.2.3 核衣殼蛋白
        1.2.4 小囊膜蛋白
    1.3 IBV臨床癥狀、病理變化
    1.4 IBV分子遺傳變異
    1.5 IBV基因分型與血清分型研究
    1.6 IB疫苗研究概況
        1.6.1 滅活疫苗
        1.6.2 弱毒疫苗
        1.6.3 基因工程疫苗研究進(jìn)展
    1.7 泛素在增強(qiáng)免疫應(yīng)答能力的研究進(jìn)展
    1.8 “PRIME-BOOST”免疫策略的研究
    1.9 開展本課題的目的與意義
第二章 泛素介導(dǎo)IBV結(jié)構(gòu)蛋白重組質(zhì)粒的免疫效應(yīng)及其“PRIME-BOOST”免疫效果的研究
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 病毒株
        2.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.3 菌株、融合真核表達(dá)質(zhì)粒
        2.1.4 主要生化試劑
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 滅活疫苗的制備
        2.2.2 DNA疫苗的制備
        2.2.3 重組質(zhì)粒的雙酶切鑒定
        2.2.4 重組質(zhì)粒的測(cè)序鑒定
        2.2.5 DNA疫苗的免疫
        2.2.6 DNA疫苗的“PRIME-BOOST”的免疫策略
        2.2.7 試驗(yàn)材料的采集與處理
    2.3 免疫效應(yīng)的檢測(cè)
        2.3.1 免疫雞血清抗體應(yīng)答的檢測(cè)
        2.3.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)免疫雞外周血特異性T細(xì)胞的動(dòng)態(tài)變化
        2.3.3 免疫雞攻毒后主要組織的病毒載量檢測(cè)
        2.3.4 IBV攻擊雛雞后感染率及保護(hù)率
    2.4 數(shù)據(jù)處理與分析
    2.5 試驗(yàn)結(jié)果
        2.5.1 DNA疫苗的制備與鑒定
        2.5.2 重組質(zhì)粒的測(cè)序鑒定
        2.5.3 動(dòng)物免疫保護(hù)試驗(yàn)結(jié)果
            2.5.3.1 免疫雞外周血T淋巴細(xì)胞的動(dòng)態(tài)變化
            2.5.3.2 免疫雞血清抗體滴度的動(dòng)態(tài)變化
            2.5.3.3 免疫雞對(duì)同源、異源毒株攻毒試驗(yàn)的保護(hù)效果
    2.6 分析與討論
        2.6.1 DNA疫苗免疫的討論與分析
        2.6.2 免疫雞外周血T淋巴細(xì)胞的動(dòng)態(tài)變化與分析
        2.6.3 免疫雞外周血IBV特異性抗體的動(dòng)態(tài)變化與分析
        2.6.4 不同IBV病毒的免疫攻毒保護(hù)率的比較分析
        2.6.5 DNA疫苗的“PRIME-BOOST”免疫策略的效果分析
第三章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷
攻讀學(xué)位期間論文發(fā)表情況及參與的科研項(xiàng)目



本文編號(hào)：3858901