伊氏錐蟲(Trypanosoma evansi)是一種常見的通過蟲媒傳播的寄生原蟲,是家畜伊氏錐蟲病(或蘇拉病)的病原。該寄生蟲主要寄生于馬、騾、駱駝、牛等多種動(dòng)物的血液當(dāng)中,能引起動(dòng)物的消瘦、貧血、神經(jīng)癥狀,嚴(yán)重的會(huì)引起動(dòng)物死亡,給畜牧養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。此外,也有伊氏錐蟲感染人的報(bào)道,表明伊氏錐蟲是一種潛在的人獸共患病病原。伊氏錐蟲有比較完備的免疫逃避機(jī)制,最典型的是通過不斷的改變體表的主要毒力因子變異表面糖蛋白(variable surface glucoprotein,VSG)從而逃避宿主的特異性免疫。也正因?yàn)檫@種免疫逃避機(jī)制的存在,導(dǎo)致現(xiàn)有的針對(duì)伊氏錐蟲病的特異性疫苗效果欠佳,亟待我們發(fā)現(xiàn)一種新的途徑防治伊氏錐蟲病。近幾年在細(xì)菌學(xué)研究方面發(fā)現(xiàn),很多病原菌通過分泌DNA酶降解宿主免疫細(xì)胞(如巨噬細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞等)釋放出來的DNA外捕網(wǎng)達(dá)到在宿主體內(nèi)擴(kuò)散的目的。本課題組以往研究發(fā)現(xiàn),寄生蟲感染的宿主能產(chǎn)生細(xì)胞外捕網(wǎng)(Extracellular Traps,ETs)捕獲侵染的寄生蟲,而寄生蟲通過分泌脫氧核糖核酸水解酶(deoxyribonuclease,DNase)起到水...

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮略表
摘要
Abstract
前言
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 伊氏錐蟲病概述
        1.1.1 伊氏錐蟲病原學(xué)
        1.1.2 流行病學(xué)
        1.1.3 致病機(jī)制
        1.1.4 臨床癥狀及病理變化
        1.1.5 診斷治療
    1.2 伊氏錐蟲免疫逃避機(jī)制
        1.2.1 針對(duì)特異性免疫的逃避機(jī)制
        1.2.2 針對(duì)非特異性免疫的逃避機(jī)制
    1.3 TatD脫氧核糖核酸酶
    1.4 研究的目的與意義
第二章 TatD-like DNase蛋白質(zhì)的生物信息學(xué)分析
    2.1 方法
        2.1.1 目的基因的序列分析
        2.1.2 目的基因的分子進(jìn)化分析
        2.1.3 目的蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)預(yù)測
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 TatD-like DNase蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)
        2.2.2 錐蟲屬及其它病原DNase蛋白質(zhì)進(jìn)化關(guān)系分析
        2.2.3 不同物種TatD-like DNase氨基酸序列比較
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
第三章 伊氏錐蟲TatD-like DNase基因的原核表達(dá)、重組蛋白質(zhì)的純化及多克隆抗體的制備
    3.1 材料
        3.1.1 蟲株、質(zhì)粒及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器
        3.1.4 主要溶液的配制
    3.2 方法
        3.2.1 伊氏錐蟲純化及cDNA的制備
        3.2.2 原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.2.3 TatD-like DNase重組蛋白質(zhì)的表達(dá)及純化
        3.2.4 動(dòng)物免疫
        3.2.5 特異性抗體檢測
        3.2.6 多克隆抗體純化及特異性檢測
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 蟲體總RNA的鑒定結(jié)果
        3.3.2 TatD-like DNase基因重組質(zhì)粒的鑒定結(jié)果
        3.3.3 TatD-like DNase重組蛋白質(zhì)純化及檢測結(jié)果
        3.3.4 免疫血清及特異性IgG的純化結(jié)果
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第四章 Tat D-like DNase蛋白質(zhì)在伊氏錐蟲的表達(dá)及定位
    4.1 材料
        4.1.1 主要試劑
        4.1.2 主要儀器
        4.1.3 主要溶液的配制
    4.2 方法
        4.2.1 TatD-like DNase基因轉(zhuǎn)錄水平分析
        4.2.2 全蟲蛋白質(zhì)中TatD-like DNase的Westernblot鑒定
        4.2.3 TatD-like DNase蛋白質(zhì)在蟲體的表達(dá)定位
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 TatD-like DNase基因轉(zhuǎn)錄水平結(jié)果
        4.3.2 TatD-like DNase蛋白質(zhì)的表達(dá)及定位
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
第五章 TatD-like DNase蛋白質(zhì)的生物化學(xué)特性及功能分析
    5.1 材料
        5.1.1 主要試劑
        5.1.2 主要儀器
    5.2 方法
        5.2.1 小鼠DNA的提取
        5.2.2 Tat D-like DNase蛋白質(zhì)的體外功能實(shí)驗(yàn)
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 小鼠DNA純化結(jié)果
        5.3.2 重組TatD-like DNase蛋白質(zhì)的生物化學(xué)特性及功能分析
    5.4 討論
    5.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間文章發(fā)表情況



本文編號(hào)：3856720