發(fā)布時(shí)間：2023-10-22 13:01

　　本論文在對(duì)奶山羊同期發(fā)情研究的基礎(chǔ)上，擬建立奶山羊胎兒成纖維細(xì)胞系，并對(duì)細(xì)胞系進(jìn)行生物學(xué)特性分析和性別鑒定，以期為奶山羊乳腺生物反應(yīng)器的建立提供基礎(chǔ)生物材料。 （1）分別采用3種方法處理母羊，試驗(yàn)證明用CIDR結(jié)合PG和FSH能取得最高同期發(fā)情率。在發(fā)情同期化程度上用CIDR結(jié)合PG及FSH的方法和CIDR結(jié)合PG及PMSG的方法用于發(fā)情同期化均有較好結(jié)果。采用自然配種，妊娠率Ⅰ組最高。 （2）手術(shù)獲取40至45日齡奶山羊胎兒，采用組織塊培養(yǎng)法和胰蛋白酶消化法分別培養(yǎng)奶山羊胎兒成纖維細(xì)胞，然后經(jīng)差速消化法和差速貼壁法分離純化，最后建立奶山羊胎兒成纖維細(xì)胞系。結(jié)果表明，原代培養(yǎng)成纖維細(xì)胞時(shí)貼塊培養(yǎng)需培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間才能長(zhǎng)出細(xì)胞，消化培養(yǎng)24h后即有細(xì)胞貼壁但培養(yǎng)液中有較多死細(xì)胞。成纖維細(xì)胞可在含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中長(zhǎng)期培養(yǎng)，傳代細(xì)胞生長(zhǎng)情況良好。該細(xì)胞呈梭形或扁的星狀，具有突起。 （3）研究了成纖維細(xì)胞的細(xì)胞活力、生長(zhǎng)曲線、群體倍增時(shí)間及核型分析。結(jié)果表明成纖維細(xì)胞凍存后活力為92.3%，生長(zhǎng)狀況與凍存前一致；生長(zhǎng)曲線呈―S‖形；群體倍增時(shí)間為40.4h；染色體2n=60，包括2...

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Summary
英文縮略詞表
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    引言
    1、同期發(fā)情
        1.1 發(fā)情機(jī)理
        1.2 同期發(fā)情的研究進(jìn)展
        1.3 影響同期發(fā)情的因素
    2、組織培養(yǎng)
        2.1 組織培養(yǎng)的原理
        2.2 細(xì)胞培養(yǎng)的發(fā)展過程
        2.3 細(xì)胞系的分類
        2.4 細(xì)胞系的鑒定
        2.5 成纖維細(xì)胞的生物學(xué)特性
        2.6 成纖維細(xì)胞系的發(fā)展進(jìn)程
        2.7 細(xì)胞培養(yǎng)的影響因素
    3、動(dòng)物乳腺生物反應(yīng)器
        3.1 乳腺生物反應(yīng)器的原理
        3.2 乳腺生物反應(yīng)器的優(yōu)點(diǎn)
        3.3 乳腺生物反應(yīng)器的發(fā)展進(jìn)程
        3.4 乳腺生物反應(yīng)器的不足
    4、性別鑒定
        4.1 性別鑒定的優(yōu)點(diǎn)
        4.2 性別決定的分類
        4.3 性別鑒定的方法
        4.4 利用 SRY 基因進(jìn)行性別鑒定
        4.5 性別鑒定的發(fā)展進(jìn)程
        4.6 性別鑒定的發(fā)展前景
    5、研究目的及意義
第二部分：試驗(yàn)部分
    試驗(yàn)一：奶山羊胎兒成纖維細(xì)胞系的建立
        引言
        1 試驗(yàn)材料
            1.1 主要試劑
            1.2 試驗(yàn)器材
            1.3 試驗(yàn)動(dòng)物
            1.4 常用試劑配制
        2 試驗(yàn)方法
            2.1 奶山羊的同期發(fā)情
            2.2 奶山羊胎兒成纖維細(xì)胞的分離和體外培養(yǎng)
        3 結(jié)果與分析
            3.1 同期發(fā)情結(jié)果
            3.2 不同培養(yǎng)方法培養(yǎng)原代成纖維細(xì)胞的結(jié)果
            3.3 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
            3.4 成纖維細(xì)胞凍存前與復(fù)蘇后的細(xì)胞存活率
        4 討論
    試驗(yàn)二:奶山羊胎兒成纖維細(xì)胞系的生物學(xué)特性分析
        引言
        1 試驗(yàn)材料
            1.1 主要試劑
            1.2 試驗(yàn)器材
            1.3 常用試劑配制
        2 試驗(yàn)方法
            2.1 細(xì)胞生物學(xué)特性分析
            2.2 微生物污染檢測(cè)
        3 結(jié)果與分析
            3.1 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)的動(dòng)態(tài)觀察
            3.2 成纖維細(xì)胞染色體觀察
            3.3 微生物污染檢測(cè)結(jié)果
        4 討論
    試驗(yàn)三：奶山羊胎兒成纖維細(xì)胞 SRY-PCR 法性別鑒定
        引言
        1 試驗(yàn)材料
            1.1 主要試劑
            1.2 試驗(yàn)器材
            1.3 常用試劑配制
        2 試驗(yàn)方法
            2.1 引物設(shè)計(jì)
            2.2 奶山羊胎兒成纖維細(xì)胞 DNA 提取
            2.3 公羊、母羊血液采集及 DNA 提取
            2.4 提取 DNA 的檢測(cè)
            2.5 梯度 PCR 反應(yīng)體系及反應(yīng)條件
            2.6 普通 PCR 反應(yīng)體系及反應(yīng)條件
            2.7 SRY 基因 PCR 產(chǎn)物膠回收
            2.8 載體連接
            2.9 轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞
            2.10 藍(lán)白斑篩選
            2.11 菌液 PCR 檢測(cè)
            2.12 序列測(cè)定
        3 結(jié)果與分析
            3.1 引物設(shè)計(jì)結(jié)果
            3.2 性別鑒定結(jié)果
            3.3 測(cè)序結(jié)果
        4 討論
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)介
導(dǎo)師簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3856569