本試驗從疑似感染革拉澤氏病的豬肺臟、心包液、關(guān)節(jié)液等病料組織中分離出3株疑似副豬嗜血桿菌,并進(jìn)行了藥敏實驗,獲取對HPS分離株有較高敏感性的藥物。采用PCR方法擴增副豬嗜血桿菌分離株的外膜蛋白P2基因并進(jìn)行測序分析,結(jié)果顯示4型分離株HS Ⅰ和HS Ⅱ分別與4型參考株SW124的核苷酸同源性為97.3%、97%,差異性為2.8%、3.1%,5型分離株HW Ⅰ與5型參考株nagasaki核苷酸同源性為2.9%。試驗確定副豬嗜血桿菌的外膜蛋白P2基因具有高度保守性。 Ⅰ.副豬嗜血桿菌的分離鑒定 將于四川南充、遂寧等地采集的疑似感染革拉澤氏病的豬肺臟、心包液、關(guān)節(jié)液等病料組織,做無菌處理后將勻漿液接種液體培養(yǎng)基培養(yǎng)過夜,涂布固體培養(yǎng)基,挑取生物學(xué)特征與副豬嗜血桿菌相似的單個菌落接種固體培養(yǎng)基,分離出3株疑似副豬嗜血桿菌。經(jīng)多次傳代純化后進(jìn)行染色鏡檢、生化試驗、藥物敏感試驗等微生物特性鑒定,隨后經(jīng)16SrDNA序列分析確定副豬嗜血桿菌。抗原抗體凝集實驗鑒定出這3株分離菌分別為血清型4型、4型和5型。動物實驗結(jié)果顯示這3株菌都有很強的毒力。藥敏試驗表明HPS分離株對部分藥物有較高的敏感性：氨基糖...

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 副豬嗜血桿菌研究進(jìn)展
        1.1 副豬嗜血桿菌的生物學(xué)特性
            1.1.1 形態(tài)學(xué)特征
            1.1.2 理化特性
            1.1.3 培養(yǎng)特性
            1.1.4 血清型研究進(jìn)展
        1.2 副豬嗜血桿菌的危害及防治
            1.2.1 流行病學(xué)
            1.2.2 副豬嗜血桿菌病的防治
        1.3 診斷方法
        1.4 毒力因子的研究現(xiàn)狀
            1.4.1 主要毒力因子及其致病機制
            1.4.2 外膜蛋白的相關(guān)研究
        1.5 生物信息學(xué)研究進(jìn)展
            1.5.1 生物信息學(xué)產(chǎn)生背景及發(fā)展現(xiàn)狀
            1.5.2 生物信息學(xué)的研究課題
            1.5.3 研究意義
    2 實驗?zāi)康募耙饬x
第二章 副豬嗜血桿菌的分離鑒定與耐藥性檢測
    1 實驗材料
        1.1 病料來源
        1.2 實驗動物
        1.3 主要試劑
        1.4 主要溶液的配制
        1.5 主要培養(yǎng)基及其配制
        1.6 PCR鑒定的引物設(shè)計合成
        1.7 主要實驗器材
    2 實驗方法和步驟
        2.1 病原菌分離純化
        2.2 分離株的微生物特性
            2.2.1 細(xì)菌形態(tài)觀察
            2.2.2 NAD試驗
            2.2.3 CAMP試驗
            2.2.4 生化試驗
            2.2.5 藥敏試驗
        2.3 16SrDNA PCR方法的鑒定
        2.4 血清型鑒定
        2.5 HPS菌株保種
        2.6 致病性試驗
            2.6.1 活菌計數(shù)
            2.6.2 動物接種
    3 結(jié)果分析
        3.1 病死豬的臨床癥狀及剖檢病理變化
        3.2 細(xì)菌的分離培養(yǎng)及微生物特性
        3.3 生化實驗鑒定結(jié)果
        3.4 藥敏試驗
        3.5 16SrDNA PCR鑒定
        3.6 血清型鑒定
        3.7 致病力試驗
    4 討論與結(jié)論
第三章 副豬嗜血桿菌ompP2基因的克隆
    1 實驗材料
        1.1 菌株和質(zhì)粒
        1.2 主要試劑
        1.3 培養(yǎng)基的制備
        1.4 主要溶液的配制
        1.5 主要儀器
    2 實驗方法
        2.1 副豬嗜血桿菌外膜蛋白ompP2基因的PCR擴增
            2.1.1 引物設(shè)計與合成
            2.1.2 HPS菌種復(fù)蘇
            2.1.3 ompP2基因的PCR擴增
            2.1.4 PCR擴增產(chǎn)物電泳檢測
        2.2 目的基因的克隆
            2.2.1 ompP2基因PCR產(chǎn)物純化回收
            2.2.2 CaCl₂法制備DH5α感受態(tài)細(xì)胞的制備
            2.2.3 PCR純化產(chǎn)物與T載體的連接
            2.2.4 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞
            2.2.5 PCR產(chǎn)物重組質(zhì)粒的鑒定
    3 結(jié)果與分析
        3.1 ompP2基因PCR擴增結(jié)果
        3.2 pMD-ompP2重組質(zhì)粒的構(gòu)建結(jié)果
        3.3 重組質(zhì)粒雙酶切鑒定結(jié)果
    4 討論
第四章 副豬嗜血桿菌ompP2基因的生物信息學(xué)分析
    1 實驗材料
        1.1 菌株
        1.2 主要生物信息學(xué)分析軟件
    2 方法
        2.1 序列測定
        2.2 ompP2基因的核苷酸序列同源性和進(jìn)化樹分析
        2.3 ompP2成熟蛋白的氨基酸序列推導(dǎo)及其同源性和進(jìn)化樹分析
        2.4 ompP2成熟蛋白的跨膜區(qū)、表面性、親水性與抗原性預(yù)測
        2.5 ompP2成熟蛋白二級結(jié)構(gòu)預(yù)測
    3 結(jié)果分析
        3.1 開放閱讀框(ORF)特征
        3.2 ompP2基因的信號肽分析結(jié)果
        3.3 推導(dǎo)的ompP2成熟蛋白的氨基酸序列
        3.4 同源性和進(jìn)化樹分析結(jié)果
        3.5 ompP2成熟蛋白的跨膜區(qū)、表面性、親水性與抗原性預(yù)測結(jié)果
        3.6 plpE成熟蛋白二級結(jié)構(gòu)預(yù)測結(jié)果
    4 討論
        4.1 關(guān)于生物信息學(xué)
        4.2 ompP2基因的分子特性分析
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄



本文編號：3855124