母雞的產(chǎn)蛋性能是家禽生產(chǎn)中的一個(gè)重要指標(biāo),與母雞卵巢的發(fā)育密切相關(guān)。卵巢發(fā)育是一個(gè)動(dòng)態(tài)的、受多種因子調(diào)控的復(fù)雜過(guò)程,但其中具體的因素及其作用機(jī)制仍不清楚。在哺乳動(dòng)物中FOXL2(Forkhead box L2,叉頭蛋白L2)一直被認(rèn)為是控制雌性正常生殖生理的關(guān)鍵因子,同時(shí)也被認(rèn)為是卵巢發(fā)育過(guò)程中重要的基因,若其發(fā)生突變將會(huì)造成卵巢早衰等不孕癥甚至癌癥。本研究以FOXL2為研究對(duì)象,通過(guò)分別在雞卵巢poGC(Pre-ovulatory follicle granulosa cells,排卵前卵泡顆粒細(xì)胞或稱(chēng)等級(jí)卵泡顆粒細(xì)胞)和phGC(Pre-hierarchical follicle granulosa cells,等級(jí)前卵泡顆粒細(xì)胞或稱(chēng)小黃卵泡顆粒細(xì)胞)中敲低FOXL2基因的表達(dá),結(jié)合轉(zhuǎn)錄組測(cè)序獲取轉(zhuǎn)錄基因的變化情況,研究FOXL2在雞卵泡選擇與卵泡發(fā)育過(guò)程中參與的生物學(xué)過(guò)程與調(diào)控作用。主要的研究結(jié)果如下:1.設(shè)計(jì)并合成三條特異性靶向FOXL2基因的siRNA,利用脂質(zhì)體在原代培養(yǎng)的雞卵巢排卵前卵泡顆粒細(xì)胞中分別轉(zhuǎn)染不同的siRNA或NC-siRNA,24h后檢測(cè)FOXL2基因在mR...

【文章頁(yè)數(shù)】：70 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
1 前言
    1.1 研究問(wèn)題的由來(lái)
    1.2 文獻(xiàn)綜述
        1.2.1 雞的卵泡發(fā)育
        1.2.2 顆粒細(xì)胞在卵巢卵泡選擇與發(fā)育中的作用
        1.2.3 FOXL2 及其編碼基因
        1.2.4 FOXL2 基因的表達(dá)與分布特點(diǎn)
        1.2.5 FOXL2 的功能
        1.2.6 RNAi技術(shù)及其在基因功能研究中的應(yīng)用
        1.2.7 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)
    1.3 目的與意義
    1.4 研究技術(shù)路線(xiàn)
2 試驗(yàn)材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料
    2.2 主要儀器、試劑和溶液配制
        2.2.1 主要儀器與設(shè)備
        2.2.2 主要試劑和試劑盒
        2.2.3 溶液配制
    2.3 試驗(yàn)方法
        2.3.1 雞顆粒細(xì)胞的分離與原代培養(yǎng)
        2.3.2 在雞顆粒細(xì)胞中敲低FOXL2 表達(dá)
        2.3.3 細(xì)胞總RNA的提取和qPCR
        2.3.4 總蛋白提取及Western Blot驗(yàn)證
        2.3.5 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序及差異表達(dá)基因分析
        2.3.6 細(xì)胞增殖、DNA復(fù)制、凋亡及細(xì)胞周期檢測(cè)
    2.4 生物信息學(xué)分析相關(guān)軟件和數(shù)據(jù)庫(kù)
        2.4.1 生物統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
        2.4.2 生物信息學(xué)分析相關(guān)軟件
        2.4.3 數(shù)據(jù)庫(kù)
3 結(jié)果與分析
    3.1 在雞顆粒細(xì)胞中敲低FOXL2 表達(dá)
        3.1.1 雞顆粒細(xì)胞總RNA提取
        3.1.2 cDNA質(zhì)量檢測(cè)
        3.1.3 轉(zhuǎn)染不同siRNA對(duì) FOXL2 基因表達(dá)量的影響
        3.1.4 轉(zhuǎn)染不同時(shí)間FOXL2 蛋白的相對(duì)表達(dá)量
    3.2 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序及分析
        3.2.1 測(cè)序樣本的敲低效果及總RNA質(zhì)量檢測(cè)
        3.2.2 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序數(shù)據(jù)評(píng)估
        3.2.3 DEGs篩選
        3.2.4 部分DEGs驗(yàn)證
        3.2.5 DEGs功能分析
    3.3 FOXL2 對(duì)雞顆粒細(xì)胞細(xì)胞行為的影響
        3.3.1 細(xì)胞增殖
        3.3.2 細(xì)胞DNA復(fù)制
        3.3.3 細(xì)胞凋亡
        3.3.4 細(xì)胞周期
4 討論
    4.1 FOXL2 在雞顆粒細(xì)胞中的作用與調(diào)控的基因
    4.2 FOXL2 對(duì)顆粒細(xì)胞的細(xì)胞增殖等行為的影響
    4.3 轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)
5 小結(jié)
    5.1 本研究得到的結(jié)果
    5.2 本研究中的創(chuàng)新點(diǎn)
    5.3 本研究的不足之處
    5.4 本研究的下一步計(jì)劃
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3852164