豬乳頭數(shù)數(shù)量性狀是種豬選育的重要指標之一，其數(shù)目的多少及對稱情況是影響窩仔數(shù)、母豬哺育率和仔豬成活率的重要因素。因此，研究與乳頭數(shù)數(shù)量性狀相關(guān)基因多態(tài)性和評估它們對乳頭數(shù)數(shù)量性狀的影響，有利于加速中國高乳頭數(shù)地方豬種的選育。淋巴增強因子(LEF-1)是TCF(T-cell specific factor (TCF) family)家族成員之一，在乳腺上皮細胞發(fā)育中有重要作用。LEF-1基因位于豬第八染色體，由12個外顯子和11個內(nèi)含子組成。研究表明，豬LEF-1基因是影響乳頭數(shù)數(shù)量性狀的候選基因，但目前研究其多態(tài)性較少且不夠深入，因此有必要進一步搜尋挖掘LEF-1基因多態(tài)性，并評估其與豬乳頭數(shù)數(shù)量性狀之間的關(guān)聯(lián)性。 本實驗首先通過qPCR的方法檢驗3日齡和180日齡關(guān)中黑豬各組織以及不同發(fā)育時期乳頭組織中LEF-1基因的表達情況，初步評估LEF-1基因在乳頭發(fā)育過程中的作用潛能。其次，提取關(guān)中黑豬、漢江黑豬、大白豬和八眉豬耳組織樣中的基因組DNA，并構(gòu)建基因池。然后，通過基因池測序和PCR-RFLP方法鑒定豬LEF-1基因的多態(tài)位點。再次，通過生物信息學分析LEF-1基因多態(tài)位點與乳頭...

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
文獻綜述
    第一章 乳腺和乳頭的形態(tài)發(fā)生及調(diào)控
        1.1 乳腺和乳頭的形態(tài)發(fā)生
            1.1.1 乳線的形成與特化
            1.1.2 乳腺基板的形成
            1.1.3 腺芽的形成
            1.1.4 原始乳腺導管分支的形成
        1.2 乳腺和乳頭形態(tài)發(fā)生的調(diào)控
            1.2.1 Wnt 信號通路對乳腺和乳頭的發(fā)育調(diào)控
            1.2.2 Fgf 信號通路對乳腺和乳頭的發(fā)育調(diào)控
            1.2.3 Tbx3 信號通路對乳腺和乳頭的發(fā)育調(diào)控
            1.2.4 Neuregulin 3 (Nrg3)對乳腺和乳頭的發(fā)育調(diào)控
            1.2.5 IGF-1/P190-B 對乳腺和乳頭的發(fā)育調(diào)控
        1.3 胚胎時期乳腺形態(tài)發(fā)生與乳腺癌
    第二章 豬乳頭數(shù)數(shù)量性狀位點的研究進展
        2.1 豬乳頭數(shù)數(shù)量性狀位點(QTL)的定位
            2.1.1 資源群體組建
            2.1.2 初步定位和精確定位
            2.1.3 高密度的 SNP
            2.1.4 候選基因的篩選
        2.2 豬乳頭數(shù)性狀 QTL 定位及候選基因的相關(guān)報道
    第三章 LEF-1 基因和其多態(tài)性研究
        3.1 LEF-1 基因概述
        3.2 LEF-1 基因與乳頭和乳腺形態(tài)發(fā)生相關(guān)通路之間的聯(lián)系
        3.3 豬 LEF-1 基因多態(tài)研究
實驗研究
    前言
    第四章 豬乳頭結(jié)構(gòu)形態(tài)觀察
        4.1 材料和方法
            4.1.1 樣品與試劑
            4.1.2 溶液試劑配方
            4.1.3 儀器與設備
            4.1.4 冰凍切片
            4.1.5 HE 染色
        4.2 結(jié)果
            4.2.1 八眉豬乳頭組織形態(tài)學觀察
            4.2.2 關(guān)中黑豬乳頭組織形態(tài)學觀察
        4.3 討論
        4.4 小結(jié)
    第五章 豬 LEF-1 基因組織表達譜
        5.1 材料方法
            5.1.1 道德聲明
            5.1.2 材料
            5.1.3 溶液試劑配方
            5.1.4 儀器與設備
            5.1.5 RNA 提取
            5.1.6 qPCR 檢測
            5.1.7 統(tǒng)計分析
        5.2 結(jié)果
            5.2.1 LEF-1 基因在 3 日齡關(guān)中黑豬各組織中的差異表達
            5.2.2 LEF-1 基因在 180 日齡關(guān)中黑豬各組織中的差異表達
            5.2.3 LEF-1 基因在關(guān)中黑豬乳腺發(fā)育不同時期中的差異表達
        5.3 討論
        5.4 小結(jié)
    第六章 豬 LEF-1 基因多態(tài)性鑒定和與乳頭數(shù)性狀關(guān)聯(lián)分析
        6.1 材料和方法
            6.1.1 樣品與試劑
            6.1.2 溶液試劑配方
            6.1.3 儀器與設備
            6.1.4 DNA 提取
            6.1.5 引物設計
            6.1.6 統(tǒng)計分析
        6.2 結(jié)果
            6.2.1 豬 LEF-1 基因多態(tài)位點鑒定
            6.2.2 群體遺傳指標
            6.2.3 基因型和等位基因頻率分析
            6.2.4 豬 LEF-1 基因多態(tài)位點與總?cè)轭^數(shù)數(shù)量性狀關(guān)聯(lián)分析
            6.2.5 單體型分析
        6.3 討論
        6.4 小結(jié)
    第七章 干擾 LEF-1 基因?qū)ωi原代乳腺上皮細胞的影響
        7.1 材料方法
            7.1.1 樣品與試劑
            7.1.2 溶液試劑配方
            7.1.3 儀器與設備
            7.1.4 豬乳腺上皮細胞分離和培養(yǎng)
            7.1.5 轉(zhuǎn)染
            7.1.6 統(tǒng)計分析
        7.2 結(jié)果
            7.2.1 豬乳腺上皮細胞分離和培養(yǎng)
            7.2.2 豬 LEF-1 基因干擾序列合成
            7.2.3 豬 LEF-1 基因干擾效率檢驗
            7.2.4 干擾豬 LEF-1 基因?qū)θ橄侔l(fā)育相關(guān)基因的影響
        7.3 討論
        7.4 小結(jié)
結(jié)論
創(chuàng)新點
進一步研究
參考文獻
附錄
致謝
作者簡介



本文編號：3852044