發(fā)布時間：2017-05-21 22:25

  本文關(guān)鍵詞：高致病性雞痘病毒滅活疫苗的制備，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：雞痘是由雞痘病毒(Fowlpox virus,FPV)引起的一種急性、接觸性傳染病,廣泛發(fā)生于養(yǎng)禽業(yè)中,各年齡和品種均易感,但以雛雞的敏感性最高,在臨床上主要表現(xiàn)為皮膚型、黏膜型和混合型。該病在世界范圍內(nèi)均有發(fā)生,主要使用鴿痘疫苗和雞痘鵪鶉化弱毒疫苗進(jìn)行免疫預(yù)防。近年來,由于毒株變異引發(fā)的FPV感染報道不斷增加,給養(yǎng)禽業(yè)造成極大的經(jīng)濟(jì)損失。特別是2009年發(fā)生于吉林省公主嶺某大型種雞場的一起皮膚型雞痘疫情,導(dǎo)致1萬只褐種蛋雞于46日齡發(fā)病后10日內(nèi)全部死亡,給該病的有效防控再次敲響了警鐘,同時也給現(xiàn)有的部分商品化疫苗的有效性帶來了挑戰(zhàn)。為了進(jìn)一步完善雞痘疫苗的免疫保護(hù)效果,本研究以當(dāng)前流行的雞痘病毒為種毒開展了滅活疫苗的實驗室研究工作。課題組前期從吉林省公主嶺暴發(fā)的皮膚型雞痘疫情病死雞體內(nèi)分離獲得一株高致病性雞痘病毒,命名為FPV JL 09C2。經(jīng)基因組測序發(fā)現(xiàn),該FPV基因組內(nèi)整合了近全長的禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生病病毒(REV)的基因。本研究選用FPV JL 09C2型毒株作為種毒,進(jìn)行了高致病性雞痘病毒滅活疫苗的研究。通過試驗確定毒株在雞胚上最佳的接毒劑量和收毒時間,即用150 ul病毒液接種SPF雞胚培養(yǎng)5 d后收毒為最佳條件。在此條件下對病毒擴大培養(yǎng),并選用甲醛作為滅活劑對病毒進(jìn)行滅活,確定3‰的甲醛處理24 h可使病毒完全滅活。依據(jù)《獸用生物制品規(guī)程》配制鋁膠佐劑,按與滅活病毒1:9的比例混合,制備好的疫苗按照國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行細(xì)菌檢驗,采用PCR擴增技術(shù)對支原體進(jìn)行檢驗。按照上述生產(chǎn)工藝制備雞痘病毒滅活疫苗進(jìn)行后續(xù)的研究。對研制的滅活疫苗進(jìn)行了最小免疫劑量的測定以及免疫效果的評價。研究結(jié)果顯示,該疫苗對雛雞的最小免疫劑量是0.2 ml。隨后對制備的疫苗進(jìn)行安全性檢驗,結(jié)果顯示,以一次單劑量、單劑量重復(fù)和一次超劑量接種實驗動物后,經(jīng)臨床觀察、體溫測定和病理觀察等證明本疫苗不產(chǎn)生臨床副作用,具有良好的安全性。通過ELISA檢測,雛雞接種疫苗后2-3周FPV抗體水平達(dá)到最高,最高OD450可達(dá)到0.55,但各組血清中均未檢測到REV抗體的存在;淋巴細(xì)胞增殖實驗檢測,與PBS組相比,滅活疫苗組CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞百分比升高CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞的百分比無明顯變化;滅活疫苗免疫組和經(jīng)特異性抗原刺激后,處于高度活化狀態(tài);對細(xì)胞因子檢測證明該疫苗可刺激雞產(chǎn)生特異性的免疫應(yīng)答,且以Th2型免疫應(yīng)答為主。通過對接種疫苗的雞攻毒,保護(hù)率可達(dá)到85%,對疫苗的保存期進(jìn)行測定,疫苗在4℃和室溫環(huán)境下分別保存9和3個月,其物理性狀以及免疫效力未變化,這與滅活疫苗特性相同。由此可見,本實驗室制備的FPV滅活疫苗可以有效的刺激機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答,從而達(dá)到預(yù)防該病的目的。該疫苗的研制對雞痘有效預(yù)防具有重要意義。
【關(guān)鍵詞】：雞痘病毒 滅活疫苗 免疫應(yīng)答 抗體
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.4
【目錄】：

• 摘要4-6
• abstract6-12
• 前言12-13
• 第一篇 文獻(xiàn)綜述13-26
• 第1章 雞痘病毒研究進(jìn)展13-23
• 1.1 定義與分類13-14
• 1.2 雞痘病毒形態(tài)結(jié)構(gòu)和理化特性14
• 1.3 雞痘病毒的分子生物學(xué)特點14-16
• 1.4 雞痘病毒的致病性16-17
• 1.5 FPV感染的診斷17-18
• 1.6 雞痘病毒的免疫特性18-19
• 1.7 雞痘的預(yù)防和治療19-20
• 1.8 FPV與禽網(wǎng)狀內(nèi)皮增生病病毒的整合20-23
• 第二章 雞痘疫苗的研究進(jìn)展23-26
• 第二篇 研究內(nèi)容26-51
• 第一章 高致病性雞痘病毒JL 09C2滅活疫苗的制備26-38
• 1 材料與方法26-31
• 2 結(jié)果31-35
• 3 討論35-37
• 4 小結(jié)37-38
• 第二章 高致病性雞痘病毒JL 09C2株滅活疫苗的保護(hù)性及安全性研究38-51
• 1 材料與方法38-42
• 2 結(jié)果42-49
• 3 討論49-50
• 4 小結(jié)50-51
• 結(jié)論51-52
• 參考文獻(xiàn)52-59
• 導(dǎo)師簡介59-60
• 作者簡介60-61
• 致謝61

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