本文關(guān)鍵詞：犬細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)感染Dot-ELISA和膠體金試紙條檢測(cè)方法建立，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：犬細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)病是由細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)寄生于犬小腸內(nèi)引起的一種人畜共患寄生蟲(chóng)病。該病呈全球流行,嚴(yán)重威脅人畜的健康,并對(duì)畜牧業(yè)的發(fā)展造成阻礙。犬是該病重要的終末宿主,也是該病流行的重要環(huán)節(jié)。細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)的檢測(cè)方法主要分為三大類(lèi),傳統(tǒng)檢測(cè)方法、免疫學(xué)檢測(cè)方法、分子生物學(xué)檢測(cè)方法。傳統(tǒng)檢測(cè)方法中的檳榔堿導(dǎo)瀉法是該病檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”。但是由于只有70%的犬對(duì)檳榔堿敏感,故該方法在臨床應(yīng)用中存在很大的局限性。因此,尋找一種有效、快速、便捷、不受外界條件影響的檢測(cè)方法是防治犬細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)病的關(guān)鍵所在�？乖东@ELISA由于其特異性強(qiáng)、敏感性高、不受個(gè)體動(dòng)物免疫應(yīng)答水平的影響、取樣方便,對(duì)樣品的質(zhì)量要求不高等特點(diǎn)非常適合細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)的檢測(cè)。本研究在實(shí)驗(yàn)室先前建立的三種犬細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)雙抗夾心ELISA檢測(cè)方法的基礎(chǔ)上,建立了具有檢測(cè)快速、操作便捷、不需要特殊儀器等特點(diǎn)的Dot-ELISA和膠體金試紙條檢測(cè)方法,為犬細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)的防治提供了行之有效的方法和理論依據(jù)。本研究首先對(duì)本實(shí)驗(yàn)室制備保存的抗細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)Ediag A864單克隆抗體2D12及抗細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)Ediag A864多克隆抗體進(jìn)行純化。通過(guò)HRP標(biāo)記的抗Ediag A864多克隆抗體建立了Dot-ELISA方法,膠體金標(biāo)記抗Ediag A864單克隆抗體建立了膠體金試紙條檢測(cè)方法,以期為犬細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)診斷提供新的技術(shù)方法。犬細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)感染Dot-ELISA檢測(cè)方法的建立本試驗(yàn)利用抗細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)Ediag A864單克隆抗體2D12和HRP標(biāo)記的抗細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)Ediag A864多克隆抗體建立了犬細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)Dot-ELISA檢測(cè)方法,確定了最佳單抗包被量為0.5μg/片、最佳待檢糞樣稀釋度為1:2、最佳酶標(biāo)抗體稀釋度為1:400、最佳封閉液為5%脫脂奶粉、最佳顯色時(shí)間為10min。所建立的Dot-ELISA檢測(cè)方法對(duì)7份新疆地區(qū)犬細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)感染參照樣品進(jìn)行檢測(cè),符合率為100%,敏感性為1:8,與犬蛔蟲(chóng)陽(yáng)性糞樣、犬賈第蟲(chóng)陽(yáng)性糞樣均無(wú)交叉反應(yīng),使用不同批次的膜片均能得到相同的結(jié)果。應(yīng)用所建立的Dot-ELISA檢測(cè)方法對(duì)69份犬糞便樣品(其中包括9份新疆地區(qū)犬細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)感染參照樣品,60份長(zhǎng)春地區(qū)臨床樣品)進(jìn)行檢測(cè),9份參照樣品的檢出率為100%(9/9),60份臨床樣品結(jié)果均為陰性。犬細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)感染膠體金試紙條的研制以金顆粒標(biāo)記的抗細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)Ediag A864單克隆抗體2D12和抗細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)Ediag A864多克隆抗體建立了犬糞便細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)檢測(cè)膠體金試紙條檢測(cè)方法,確定了金標(biāo)抗體最佳稀釋度為10:1、硝酸纖維素膜為Millipore 135s、T線(xiàn)多抗最佳包被濃度為1mg/m L、C線(xiàn)抗體最佳包被濃度為0.5mg/m L。所研制的犬細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)感染檢測(cè)膠體金試紙條對(duì)10份新疆地區(qū)犬細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)感染參照樣品進(jìn)行檢測(cè),符合率為100%,敏感性為1:4,與犬蛔蟲(chóng)陽(yáng)性糞樣、犬賈第蟲(chóng)陽(yáng)性糞樣均無(wú)交叉反應(yīng),分別使用不同保存期(1個(gè)月、2個(gè)月、3個(gè)月、4個(gè)月)和不同儲(chǔ)存條件(室溫、4℃、37℃)的試紙條均能得到相同的結(jié)果。應(yīng)用所建立的膠體金試紙條檢測(cè)方法對(duì)96份犬糞便樣品(其中包括36份新疆地區(qū)犬細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)感染參照樣品,60份長(zhǎng)春地區(qū)臨床樣品)進(jìn)行檢測(cè),36份參照樣品檢出率為97.2%(35/36),60份臨床樣品結(jié)果均為陰性。
【關(guān)鍵詞】：細(xì)粒棘球絳蟲(chóng) Dot-ELISA 膠體金試紙條 檢測(cè)方法
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S858.292
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-11
• 前言11-13
• 第一篇 文獻(xiàn)綜述13-27
• 第1章 犬細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)診斷方法的研究進(jìn)展13-27
• 1.1 病原學(xué)13-17
• 1.2 常規(guī)診斷方法17-18
• 1.3 免疫學(xué)診斷方法18-22
• 1.4 分子生物學(xué)診斷方法22-25
• 1.5 防治措施25-27
• 第二篇 研究?jī)?nèi)容27-62
• 第1章 EdiagA864抗原的制備及抗體的純化與標(biāo)記27-37
• 1.1 材料27-29
• 1.2 方法29-33
• 1.3 結(jié)果33-35
• 1.4 討論35-36
• 1.5 小結(jié)36-37
• 第2章 犬細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)感染Dot-ELISA檢測(cè)方法的建立37-47
• 2.1 材料37
• 2.2 方法37-40
• 2.3 結(jié)果40-43
• 2.4 討論43-45
• 2.5 小結(jié)45-47
• 第3章 犬細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)感染檢測(cè)膠體金試紙條的研制47-62
• 3.1 材料47-49
• 3.2 方法49-52
• 3.3 結(jié)果52-58
• 3.4 討論58-60
• 3.5 小結(jié)60-62
• 結(jié)論62-63
• 參考文獻(xiàn)63-71
• 導(dǎo)師簡(jiǎn)介71-72
• 作者簡(jiǎn)介及科研成果72-73
• 致謝73

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4 高s

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