本文關(guān)鍵詞：犬細粒棘球絳蟲感染Dot-ELISA和膠體金試紙條檢測方法建立，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：犬細粒棘球絳蟲病是由細粒棘球絳蟲寄生于犬小腸內(nèi)引起的一種人畜共患寄生蟲病。該病呈全球流行,嚴重威脅人畜的健康,并對畜牧業(yè)的發(fā)展造成阻礙。犬是該病重要的終末宿主,也是該病流行的重要環(huán)節(jié)。細粒棘球絳蟲的檢測方法主要分為三大類,傳統(tǒng)檢測方法、免疫學(xué)檢測方法、分子生物學(xué)檢測方法。傳統(tǒng)檢測方法中的檳榔堿導(dǎo)瀉法是該病檢測的“金標準”。但是由于只有70%的犬對檳榔堿敏感,故該方法在臨床應(yīng)用中存在很大的局限性。因此,尋找一種有效、快速、便捷、不受外界條件影響的檢測方法是防治犬細粒棘球絳蟲病的關(guān)鍵所在�？乖东@ELISA由于其特異性強、敏感性高、不受個體動物免疫應(yīng)答水平的影響、取樣方便,對樣品的質(zhì)量要求不高等特點非常適合細粒棘球絳蟲的檢測。本研究在實驗室先前建立的三種犬細粒棘球絳蟲雙抗夾心ELISA檢測方法的基礎(chǔ)上,建立了具有檢測快速、操作便捷、不需要特殊儀器等特點的Dot-ELISA和膠體金試紙條檢測方法,為犬細粒棘球絳蟲的防治提供了行之有效的方法和理論依據(jù)。本研究首先對本實驗室制備保存的抗細粒棘球絳蟲Ediag A864單克隆抗體2D12及抗細粒棘球絳蟲Ediag A864多克隆抗體進行純化。通過HRP標記的抗Ediag A864多克隆抗體建立了Dot-ELISA方法,膠體金標記抗Ediag A864單克隆抗體建立了膠體金試紙條檢測方法,以期為犬細粒棘球絳蟲診斷提供新的技術(shù)方法。犬細粒棘球絳蟲感染Dot-ELISA檢測方法的建立本試驗利用抗細粒棘球絳蟲Ediag A864單克隆抗體2D12和HRP標記的抗細粒棘球絳蟲Ediag A864多克隆抗體建立了犬細粒棘球絳蟲Dot-ELISA檢測方法,確定了最佳單抗包被量為0.5μg/片、最佳待檢糞樣稀釋度為1:2、最佳酶標抗體稀釋度為1:400、最佳封閉液為5%脫脂奶粉、最佳顯色時間為10min。所建立的Dot-ELISA檢測方法對7份新疆地區(qū)犬細粒棘球絳蟲感染參照樣品進行檢測,符合率為100%,敏感性為1:8,與犬蛔蟲陽性糞樣、犬賈第蟲陽性糞樣均無交叉反應(yīng),使用不同批次的膜片均能得到相同的結(jié)果。應(yīng)用所建立的Dot-ELISA檢測方法對69份犬糞便樣品(其中包括9份新疆地區(qū)犬細粒棘球絳蟲感染參照樣品,60份長春地區(qū)臨床樣品)進行檢測,9份參照樣品的檢出率為100%(9/9),60份臨床樣品結(jié)果均為陰性。犬細粒棘球絳蟲感染膠體金試紙條的研制以金顆粒標記的抗細粒棘球絳蟲Ediag A864單克隆抗體2D12和抗細粒棘球絳蟲Ediag A864多克隆抗體建立了犬糞便細粒棘球絳蟲檢測膠體金試紙條檢測方法,確定了金標抗體最佳稀釋度為10:1、硝酸纖維素膜為Millipore 135s、T線多抗最佳包被濃度為1mg/m L、C線抗體最佳包被濃度為0.5mg/m L。所研制的犬細粒棘球絳蟲感染檢測膠體金試紙條對10份新疆地區(qū)犬細粒棘球絳蟲感染參照樣品進行檢測,符合率為100%,敏感性為1:4,與犬蛔蟲陽性糞樣、犬賈第蟲陽性糞樣均無交叉反應(yīng),分別使用不同保存期(1個月、2個月、3個月、4個月)和不同儲存條件(室溫、4℃、37℃)的試紙條均能得到相同的結(jié)果。應(yīng)用所建立的膠體金試紙條檢測方法對96份犬糞便樣品(其中包括36份新疆地區(qū)犬細粒棘球絳蟲感染參照樣品,60份長春地區(qū)臨床樣品)進行檢測,36份參照樣品檢出率為97.2%(35/36),60份臨床樣品結(jié)果均為陰性。
【關(guān)鍵詞】：細粒棘球絳蟲 Dot-ELISA 膠體金試紙條 檢測方法
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S858.292
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-11
• 前言11-13
• 第一篇 文獻綜述13-27
• 第1章 犬細粒棘球絳蟲診斷方法的研究進展13-27
• 1.1 病原學(xué)13-17
• 1.2 常規(guī)診斷方法17-18
• 1.3 免疫學(xué)診斷方法18-22
• 1.4 分子生物學(xué)診斷方法22-25
• 1.5 防治措施25-27
• 第二篇 研究內(nèi)容27-62
• 第1章 EdiagA864抗原的制備及抗體的純化與標記27-37
• 1.1 材料27-29
• 1.2 方法29-33
• 1.3 結(jié)果33-35
• 1.4 討論35-36
• 1.5 小結(jié)36-37
• 第2章 犬細粒棘球絳蟲感染Dot-ELISA檢測方法的建立37-47
• 2.1 材料37
• 2.2 方法37-40
• 2.3 結(jié)果40-43
• 2.4 討論43-45
• 2.5 小結(jié)45-47
• 第3章 犬細粒棘球絳蟲感染檢測膠體金試紙條的研制47-62
• 3.1 材料47-49
• 3.2 方法49-52
• 3.3 結(jié)果52-58
• 3.4 討論58-60
• 3.5 小結(jié)60-62
• 結(jié)論62-63
• 參考文獻63-71
• 導(dǎo)師簡介71-72
• 作者簡介及科研成果72-73
• 致謝73

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4 高s

本文編號：384586