在現(xiàn)代奶牛群體改良體系中,種公牛是影響奶牛群體遺傳品質(zhì)的主要因素,而繁殖性狀是種公牛生產(chǎn)的重要經(jīng)濟(jì)性狀,是決定種公牛站經(jīng)濟(jì)效益的關(guān)鍵因素。公牛的精液品質(zhì)性狀屬于低遺傳力的數(shù)量性狀,受多基因調(diào)控,通過常規(guī)育種手段選育周期長、效率低,迫切需要新的育種技術(shù)和手段。分子育種技術(shù)已成為世界生物育種科學(xué)的發(fā)展潮流,而高繁殖力公牛的定向育種則是奶牛育種產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要方向。根據(jù)國內(nèi)外組學(xué)研究和本實驗室的基因芯片前期分析結(jié)果,結(jié)合基因生理生化功能,本研究確定KATNAL1 和 GSK3α/β基因為公牛精液品質(zhì)性狀相關(guān)的候選基因。從啟動子、可變剪切、miRNA以及SNP等水平上,探求可用于中國荷斯坦種公牛精液品質(zhì)性狀選育的功能性SNPs,并嘗試探討基于這些功能性SNPs的分子調(diào)控機理。主要研究結(jié)果分述如下：1.中國荷斯坦公牛KATNAL1基因可變剪切體鑒定與表達(dá)分析KATNAL1基因在精子發(fā)生過程中發(fā)揮著重要作用。采用RT-PCR方法初步鑒定KATNAL1基因的不同可變剪切體,并探索其在成年公牛、小公牛的不同組織中的表達(dá)規(guī)律,采用RT-qPCR方法測定了不同剪切體以及總mRNA在成年公牛和小公牛睪丸中的表...

【文章頁數(shù)】：187 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮寫符號(ABBREVIATION)
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    第一章 公牛精液品質(zhì)性狀選育研究進(jìn)展
        1 公牛精液品質(zhì)的主要指標(biāo)
        2 影響公牛精液品質(zhì)性狀的主要因素
        3 我國公牛繁殖產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀
            3.1 種公牛優(yōu)質(zhì)凍精的產(chǎn)能低
            3.2 種公牛凍精在奶業(yè)發(fā)展上的作用有待提高
            3.3 種公�！白灾髋嘤蹦芰Σ�
        4 公牛精液品質(zhì)性狀分子選育研究策略
            4.1 公牛精液品質(zhì)性狀基因的克隆與功能驗證
            4.2 測序和芯片技術(shù)的應(yīng)用
        參考文獻(xiàn)
    第二章 公牛精液品質(zhì)性狀選育的分子基礎(chǔ)
        1 單核苷酸多態(tài)性
            1.1 SNP概念及分類
            1.2 SNPs特點
            1.3 SNPs檢測方法
            1.4 SNP應(yīng)用
            1.5 SNP與生精障礙
        2 可變剪切
            2.1 可變剪切的定義
            2.2 可變剪切的分類
            2.3 可變剪切的作用
            2.4 可變剪切的調(diào)控
            2.5 睪丸中發(fā)生的可變剪切事件
            2.6 可變剪切與SNP
        3 啟動子
            3.1 概念
            3.2 真核啟動子類型
            3.3 啟動子研究方法
            3.4 牛基因啟動子與SNP
        4 MIRNA
            4.1 miRNA定義及特征
            4.2 miRNA的生物合成
            4.3 miRNA靶基因的預(yù)測
            4.4 miRNA的功能
            4.5 miRNA與睪丸
            4.6 miRNA相關(guān)單核苷酸多態(tài)性
        參考文獻(xiàn)
    第三章 KATNAL1和GSK3α/β基因研究進(jìn)展
        1 類劍蛋白P60亞基A1
        2 糖原合成酶激酶3(GSK3)的研究進(jìn)展
            2.1 GSK3發(fā)現(xiàn)與分類
            2.2 GSK3亞細(xì)胞定位
            2.3 GSK3作用底物
            2.4 參與的信號通路
            2.5 GSK3與抑制劑
            2.6 GSK3與精子
        3 研究目的及意義
            3.1 研究問題和假設(shè)的提出
            3.2 研究目的和意義
        參考文獻(xiàn)
第二部分 試驗研究
    第四章 中國荷斯坦公牛KATNAL1基因可變剪切體鑒定與表達(dá)分析
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 試驗方法
            1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
        2 試驗結(jié)果
            2.1 RNA檢測結(jié)果
            2.2 可變剪切體的鑒定
            2.3 兩種剪切體基因結(jié)構(gòu)的比對
            2.4 牛KATNAL1基因及不同轉(zhuǎn)錄本相對定量
            2.5 生物信息學(xué)分析
        3 討論
        4 小結(jié)
        參考文獻(xiàn)
    第五章 中國荷斯坦公牛KATNAL1基因啟動子活性分析與功能SNPS鑒定
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 試驗方法
            1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
        2 結(jié)果
            2.1 牛KATNAL1基因啟動子生物信息學(xué)分析
            2.2 牛KATNAL1基因第二啟動子和保留的內(nèi)含子附近區(qū)域SNP鑒定
            2.3 兩個SNPs功能性預(yù)測
            2.4 兩個SNPs基因分型(Bi-PASA和RFLP)
            2.5 牛KATNAL1基因遺傳參數(shù)統(tǒng)計分析
            2.6 三個種公牛站精液品質(zhì)數(shù)據(jù)統(tǒng)計
            2.7 牛KATNAL1基因不同基因型與公牛精液性狀的相關(guān)性分析
            2.8 牛KATNAL1基因不同單倍型組合與公牛精液品質(zhì)性狀的相關(guān)性分析
            2.9 細(xì)胞轉(zhuǎn)染與熒光檢測的結(jié)果
            2.10 牛KATNAL1基因缺失啟動子活性分析
        3 討論
        4 小結(jié)
        參考文獻(xiàn)
    第六章 牛KATNAL1基因3’UTR靶位點SNP對BTA-MIR-22-5P調(diào)控靶基因表達(dá)的影響
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
            1.3 統(tǒng)計分析
        2 結(jié)果
            2.1 SNP的發(fā)現(xiàn)及生物信息學(xué)分析
            2.2 突變位點生物信息學(xué)分析
            2.3 睪丸miRNA芯片關(guān)于bta-miR-3600/22-5p簇表達(dá)量分析
            2.4 雙熒光素酶活性分析
            2.5 不同基因型KATNAL1 mRNA表達(dá)量分析
            2.6 SNP分型
            2.7 牛KATNAL1基因不同基因型與公牛精液性狀的相關(guān)性分析
        3 討論
        4 小結(jié)
        參考文獻(xiàn)
    第七章 中國荷斯坦公牛GSK3β基因可變剪切體鑒定與基因表達(dá)分析
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
            1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
        2 試驗結(jié)果
            2.1 可變剪切體的鑒定
            2.2 牛GSK3β基因及不同轉(zhuǎn)錄本的組織表達(dá)分析
            2.3 生物信息學(xué)分析
        3 討論
        4 小結(jié)
        參考文獻(xiàn)
    第八章 PRE-MIR-320B序列中SNP G12A通過靶向調(diào)控GSK3β與中國荷斯坦公牛的鮮精密度存在關(guān)聯(lián)
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
            1.3 統(tǒng)計分析
        2 結(jié)果
            2.1 SNP鑒定與分型
            2.2 不同基因型與公牛精液性狀的相關(guān)性分析
            2.3 bta-miR-320b及其靶基因生物信息學(xué)預(yù)測
            2.4 雙熒光素酶活性檢測
            2.5 頸環(huán)法定量miRNA
            2.6 兩種基因型成年公牛和小公牛的GSK3βmRNA表達(dá)比較
        3 討論
        4 小結(jié)
        參考文獻(xiàn)
    第九章 GSK3α基因核心啟動子的克隆和功能性SNPS的鑒定
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
            1.3 統(tǒng)計分析
        2 結(jié)果
            2.1 �；騝DNA序列、編碼氨基酸和蛋白結(jié)構(gòu)域分析
            2.2 牛GSK3α基因缺失啟動子活性分析
            2.3 牛GSK3α基因啟動子區(qū)域CpG島預(yù)測
            2.4 高、低精子活力牛GSK3α基因核心啟動子區(qū)甲基化差異分析
            2.5 牛GSK3α基因SNP鑒定與分型
            2.6 關(guān)聯(lián)性分析
        3 討論
        4 小結(jié)
        參考文獻(xiàn)
全文結(jié)論
創(chuàng)新點及下一步研究工作
附錄
致謝
攻讀博士期間發(fā)表論文



本文編號：3848974