分娩啟動是一個復(fù)雜的生理過程,影響因素有很多,包括機(jī)體內(nèi)部環(huán)境和外界環(huán)境兩方面。外界因素包括攝入食物、不當(dāng)?shù)臋C(jī)械運(yùn)動等;內(nèi)在調(diào)節(jié)主要包括激素、免疫炎癥以及細(xì)胞凋亡等。目前關(guān)于分娩啟動過程具體分子機(jī)制的研究鮮有報道。在本實(shí)驗(yàn)室大白豬分娩前后胎盤組織轉(zhuǎn)錄本測序中篩選出GPX1差異表達(dá)基因,有研究表明GPX1可以緩解氧化應(yīng)激反應(yīng),GPX1缺乏會導(dǎo)致非正常分娩。本試驗(yàn)旨在探究谷胱甘肽過氧化物酶GPX1在分娩啟動的進(jìn)程中的作用。為了探究GPX1是否在分娩啟動中發(fā)揮作用,我們在懷孕15.5天孕鼠腹腔注射LPS構(gòu)建小鼠早產(chǎn)模型,檢測胎膜中ROS水平、氧化標(biāo)志基因HSP90、炎癥因子TNFα、IL1β以及分娩相關(guān)基因COX2的表達(dá)變化。在WISH細(xì)胞中分別轉(zhuǎn)染干涉片段si-GPX1和超表達(dá)質(zhì)粒,檢測分娩相關(guān)基因HSP90、COX2、Caspase3、IL1β以及NFκB。為了判斷GPX1發(fā)揮作用的通路,采用NFκB通路抑制劑CAPE處理WISH細(xì)胞,通過細(xì)胞免疫熒光檢測NFκB以及COX2的表達(dá)變化。通過ELISA檢測清平豬有無分娩征兆的羊水中PGE2的濃度。在WISH細(xì)胞中轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒pCMV-GP...

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 前言
    2 分娩啟動的研究進(jìn)展
        2.1 胎膜破裂在分娩啟動中的作用
        2.2 激素在分娩啟動中的作用
        2.3 免疫炎癥在分娩啟動中的作用
        2.4 氧化應(yīng)激與分娩啟動
        2.5 GPXs簡介
        2.6 NFκB參與分娩啟動
        2.7 研究目的與意義
第二章 材料和方法
    1 試驗(yàn)材料
        1.1 活體試驗(yàn)
        1.2 試驗(yàn)樣品
        1.3 菌株、載體和細(xì)胞系
        1.4 主要試劑和儀器
        1.5 主要溶液的配制
    2 試驗(yàn)方法
        2.1 超表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2 細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.3 脂質(zhì)體介導(dǎo)的細(xì)胞轉(zhuǎn)染(6孔板)
        2.4 熒光定量PCR分析
        2.5 WesternBlot試驗(yàn)方法
        2.6 酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)分析
        2.7 細(xì)胞免疫熒光分析
        2.8 生物學(xué)工具
        2.9 統(tǒng)計學(xué)分析
第三章 結(jié)果與分析
    1 GPX1、COX2在早產(chǎn)鼠中上調(diào)表達(dá)
    2 GPX1真核超表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
    3 GPX1正向調(diào)節(jié)COX2的表達(dá)
    4 GPX1通過NFκB調(diào)節(jié)COX2的表達(dá)
    5 GPX1通過NFκB通路調(diào)節(jié)COX2的表達(dá)影響前列腺激素水平
    6 PGE2反饋調(diào)節(jié)GPX1、NFκB和COX2的表達(dá)
第四章 討論
    1 早產(chǎn)鼠模型中氧化應(yīng)激水平顯著上升
    2 GPX1在WISH細(xì)胞中對NFκB通路的調(diào)控
    3 GPX1通過NFκB通路對PGE2水平的調(diào)控
    4 PGE2對GPX1、NFκB與COX2的反饋調(diào)控
第五章 總結(jié)
    1 主要結(jié)論
    2 本研究創(chuàng)新之處
    3 本研究的不足之處
    4 下一步工作計劃
參考文獻(xiàn)
研究生在讀期間發(fā)表的論文
致謝



本文編號：3846247