鱟素(Tachyplesin Ⅰ)是一種從鱟的血液中提取的由17個氨基酸殘基組成的陽離子抗菌肽,具有廣譜抗細菌、真菌、霉菌、病毒、原蟲、抑制腫瘤細胞增殖和誘導癌細胞分化等多種生物活性,是一種具有巨大潛在應用價值的肽類抗生素；然而由于鱟素對宿主菌的強烈的抑殺作用使得難于實現(xiàn)其基因工程高效表達,這嚴重制約了鱟素的研究和應用。本實驗通過先天抗鱟素篩選和后天連續(xù)耐鱟素誘導選育兩種方法來篩選抗鱟素的飼用芽孢桿菌菌株,以期得到抗鱟素的宿主菌,解決鱟素對宿主菌的強烈抑殺這一關鍵難題。本論文的內容包括以下幾個部分：1、采用肉湯微量稀釋法測定了鱟素對枯草芽孢桿菌BS168和WB800、環(huán)狀芽孢桿菌CICC22015、遲緩芽孢桿菌CICC10365、堅強芽孢桿菌CICC23258、納豆芽孢桿菌CICC20443、短小芽孢桿菌CICC9003、凝結芽孢桿菌AS 1.2009、巨大芽孢桿菌AS1.223、地衣芽孢桿菌AS1.269和蠟狀芽孢桿菌AS1.196的抑殺活性；結果鱟素對它們的MIC(最小抑菌濃度)分別為20、20、20、2.5、40、40、20、20、20、20、20ug/ml,MBC(最小殺菌濃度...

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 鱟及鱟素的研究進展
        1.1.1 鱟的種類及分布
        1.1.2 鱟源抗菌肽
        1.1.3 鱟素的抗菌能力
        1.1.4 鱟素的應用前景
        1.1.5 鱟素的抗菌機制
        1.1.6 鱟素的來源
        1.1.7 鱟素的基因工程表達現(xiàn)狀
    1.2 細菌對菌肽產生抗藥性研究進展
        1.2.1 細菌對抗菌肽抗藥性的出現(xiàn)
        1.2.2 細菌對抗菌肽AMPs抗藥性的分類
        1.2.3 細菌對抗菌肽AMPs的抗藥性機制
    1.3 本論文的立題依據(jù)和研究內容
第二章 鱟素對幾種飼用芽孢桿菌的抑殺作用
    2.1 引言
    2.2 材料和方法
        2.2.1. 實驗材料
        2.2.2. 實驗方法
    2.3 結果與分析
    2.4 討論
    2.5 本章小結
第三章 枯草芽孢桿菌BS168抗藥性致死突變標志微波誘變篩選研究
    3.1 引言
    3.2 材料和方法
        3.2.1 實驗材料
        3.2.2 實驗方法
    3.3 結果與分析
        3.3.1 鱟素對枯草芽孢桿菌BS168致死濃度的測定
        3.3.2 微波誘變劑量的測定
        3.3.3 微波誘變結果
        3.3.4 微波誘變前后原始菌和誘變菌MIC的測定
    3.4 討論
    3.5 本章小結
第四章 枯草芽孢桿菌BS168耐鱟素誘導及原始菌和誘導菌生理生化研究
    4.1 引言
    4.2 實驗材料
        4.2.1. 實驗菌株
        4.2.2. 鱟素溶液的配制
        4.2.3. 培養(yǎng)基和試劑的配制
        4.2.4. 主要的儀器設備
    4.3 實驗方法
        4.3.1 體外耐藥性的誘導試驗
        4.3.2 體外藥敏試驗的測定
        4.3.3 高抗藥菌株抗藥穩(wěn)定性檢測
        4.3.4 鱟素對BS168原始菌和誘導菌QP抑菌動力學的研究
        4.3.5 鱟素對枯草芽孢桿菌BS168原始菌和誘導菌QP細胞膜滲透性的影響
        4.3.6 電鏡下觀察鱟素對細菌誘導前后的形態(tài)學及超微結構變化
    4.4 結果與分析
        4.4.1 鱟素濃度逐級遞增營養(yǎng)肉湯誘導法
        4.4.2 高抗藥菌株(QP)抗藥穩(wěn)定性檢測
        4.4.3 鱟素對BS168原始菌和誘導菌QP抑菌動力學的研究
        4.4.4 鱟素對枯草芽孢桿菌BS168原始菌和誘導菌QP細胞膜滲透性的影響
        4.4.5 鱟素誘導前后菌的超微結構的變化
    4.5 討論
    4.6 本章小結
第五章 誘導菌耐鱟素相關機制分析
    5.1 引言
    5.2 材料
        5.2.1 實驗菌種
        5.2.2 主要儀器設備
        5.2.3 實驗試劑
    5.3 實驗方法
        5.3.1 枯草芽孢桿菌BS168原始菌和不同鱟素濃度誘導菌胞外蛋白酶酶活的測定
        5.3.2 鱟素長期誘導對菌株細胞壁膜負電荷數(shù)影響的測定
        5.3.3 BS168原始菌和誘導菌胞外蛋白酶酶譜檢測
        5.3.4 BS168原始菌和誘導菌胞外蛋白酶的雙向電泳分析
    5.4 結果與分析
        5.4.1 枯草芽孢桿菌BS168原始菌和誘導菌胞外蛋白酶酶活的測定
        5.4.2 鱟素長期誘導對菌株細胞壁膜負電荷數(shù)影響的測定
        5.4.3 BS168原始菌和誘導菌胞外蛋白酶酶譜檢測
        5.4.4 BS168原始菌和誘導菌胞外蛋白酶的雙向電泳分析
    5.5 討論
        5.5.1 枯草芽孢桿菌BS168原始菌和誘導菌胞外蛋白酶酶活比較
        5.5.2 枯草芽孢桿菌BS168原始菌和誘導菌胞外蛋白酶酶譜分析
        5.5.3 鱟素長期誘導對枯草芽孢桿菌細胞壁膜負電荷的影響
        5.5.4 BS168原始菌和誘導菌胞外蛋白酶的雙向電泳凝膠圖譜分析
    5.6 本章小結
總結與展望
    本文總結
    展望
    本論文創(chuàng)新之處
參考文獻
致謝
作者簡介



本文編號：3846263