母細(xì)胞分裂成具有不同細(xì)胞命運的兩個子細(xì)胞稱為細(xì)胞的不對稱分裂,對于產(chǎn)生多樣性發(fā)育至關(guān)重要。哺乳動物雌性減數(shù)分裂通過兩輪連續(xù)的不對稱細(xì)胞分裂產(chǎn)生一個單倍體卵子和兩個小極體。這種不對稱的細(xì)胞分裂是通過不對稱的紡錘體定位產(chǎn)生的。通過這種不對稱分裂卵母細(xì)胞完成自身極性建立,這對于早期胚胎極性的確定是至關(guān)重要的。這個過程需要微管蛋白,肌動蛋白以及多種極性蛋白協(xié)作調(diào)控。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)作為細(xì)胞內(nèi)最大的膜細(xì)胞器參與多種蛋白質(zhì)的合成以及加工修飾,當(dāng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激時,多種蛋白合成加工受阻,這會導(dǎo)致卵母細(xì)胞發(fā)育受阻。布雷非德菌素A(Brefeldin A,BFA)可以抑制從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)到高爾基體的蛋白轉(zhuǎn)運,是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的誘導(dǎo)劑,同時它可以破壞卵母細(xì)胞的不對稱分裂。本實驗以小鼠卵母細(xì)胞為材料,在BFA處理下破壞小鼠不對稱分裂,通過熒光定量PCR技術(shù)檢測出應(yīng)激標(biāo)志分子上調(diào),因此,我們認(rèn)為小鼠卵母細(xì)胞不對稱分裂的破壞可能與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激有關(guān)。隨后我們克隆了在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激中有緩解作用的應(yīng)激因子鈣網(wǎng)蛋白(Calreticulin,CRT)基因,構(gòu)建了pCRT-Venus重組質(zhì)粒。通過體外轉(zhuǎn)錄技術(shù)及顯微操作技術(shù)將其在卵母細(xì)胞中過表達(dá),通過統(tǒng)計...

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 哺乳動物卵母細(xì)胞減數(shù)分裂成熟的分子機制
        1.1.1 紡錘體的組裝、定位與遷移
        1.1.2 皮質(zhì)肌動蛋白帽的形成
        1.1.3 收縮環(huán)
        1.1.4 皮質(zhì)顆粒
        1.1.5 染色體的分離
        1.1.6 減數(shù)分裂過程中,一些極性蛋白的作用
        1.1.7 減數(shù)分裂異常的卵母細(xì)胞
    1.2 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激研究進(jìn)展
        1.2.1 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號通路
        1.2.2 鈣網(wǎng)蛋白在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激中的作用
    1.3 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對卵母細(xì)胞成熟的影響
        1.3.1 ER應(yīng)激和UPR信號在卵母細(xì)胞成熟以及早期胚胎發(fā)育中作用。
        1.3.2 鈣網(wǎng)蛋白對卵母細(xì)胞激活的影響
第二章 布雷菲德菌素A對小鼠卵母細(xì)胞分裂成熟的影響
    2.1 材料及設(shè)備
        2.1.1 試驗材料
        2.1.2 試驗設(shè)備
    2.2 方法
        2.2.1 對照組小鼠卵母細(xì)胞的收集與培養(yǎng)
        2.2.2 BFA處理組小鼠卵母細(xì)胞
        2.2.3 免疫熒光染色
        2.2.4 實時熒光定量PCR
    2.3 實驗結(jié)果處理與分析
        2.3.1 BFA處理導(dǎo)致卵母細(xì)胞極性分裂被破壞
        2.3.2 不同時間點去除BFA胞質(zhì)分裂恢復(fù)情況
        2.3.3 BFA破壞小鼠卵母細(xì)胞中紡錘體的遷移
        2.3.4 BFA破壞小鼠卵母細(xì)胞中p-MAPK紡錘體極點分布
        2.3.5 BFA對小鼠卵母細(xì)胞中極性蛋白的作用
        2.3.6 BFA導(dǎo)致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志分子上調(diào)
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 鈣網(wǎng)蛋白在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激中的作用
    3.1 材料及設(shè)備
        3.1.1 試驗材料
        3.1.2 試驗設(shè)備
    3.2 方法
        3.2.1 鈣網(wǎng)蛋白重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.2.2 體外轉(zhuǎn)錄及顯微注射CRT重組質(zhì)粒
    3.3 實驗結(jié)果處理與分析
        3.3.1 應(yīng)激蛋白CRT重組質(zhì)粒的構(gòu)建及顯微注射
        3.3.2 顯微注射CRT對卵母細(xì)胞成熟的影響
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第四章 結(jié)論
本課題創(chuàng)新點與進(jìn)一步研究計劃
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介



本文編號：3840189