黃花苜蓿在抗干旱、抗寒冷、耐鹽等方面的優(yōu)良抗逆性,使其成為培育優(yōu)良品種的重要種質(zhì)資源和基因庫。NAC轉(zhuǎn)錄因子廣泛參與了植物的各項生理活動,在植物適應(yīng)逆境脅迫中發(fā)揮重要的作用。本研究以轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)為基礎(chǔ),克隆獲得了1個序列全長為756 bp的野生黃花苜蓿NAC轉(zhuǎn)錄因子基因Mf NAC63,其編碼251個氨基酸,分子量(Mw)為29.07 k Da。生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)其編碼蛋白在1-75位氨基酸處有NAM結(jié)構(gòu)域,屬于NAC轉(zhuǎn)錄因子家族成員,且NAM結(jié)構(gòu)域具有A、B、C、D和E五個亞結(jié)構(gòu)域,并在亞結(jié)構(gòu)域D含有核定位信號。經(jīng)預(yù)測Mf NAC63無跨膜結(jié)構(gòu)域和信號肽,有65.2%的概率定位在細(xì)胞核內(nèi)。以p CAMBIA1300(35S-s GFP)為骨架,構(gòu)建瞬時表達(dá)載體p CAMBIA1300(35S-Mf NAC63-s GFP),注射煙草下表皮細(xì)胞后,利用激光顯微鏡進(jìn)行觀察,發(fā)現(xiàn)Mf NAC63定位在細(xì)胞核內(nèi)。同時,驗證了Mf NAC63在酵母中具有轉(zhuǎn)錄激活功能,且功能域位于蛋白的C端。Mf NAC63在野生黃花苜蓿的根、莖和葉中均有表達(dá),且在葉中的表達(dá)量最高,同時其表達(dá)受鹽或干旱脅迫調(diào)節(jié),...

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略詞對照表
一 引言
    1 黃花苜蓿研究概況
        1.1 黃花苜蓿地理分布及生長環(huán)境
        1.2 黃花苜蓿優(yōu)良特性
    2 植物NAC轉(zhuǎn)錄因子研究概況
        2.1 NAC轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)
        2.2 NAC轉(zhuǎn)錄因子生物學(xué)功能
    3 研究的目的及意義
二 實驗材料與方法
    1 實驗材料與試劑
        1.1 植物材料
        1.2 菌種
        1.3 質(zhì)粒
        1.4 試劑
        1.5 引物
    2 實驗方法
        2.1 PCR擴(kuò)增
        2.2 生物信息學(xué)分析
        2.3 亞細(xì)胞定位
        2.4 轉(zhuǎn)錄激活功能驗證
        2.5 基因表達(dá)分析
        2.6 遺傳轉(zhuǎn)化
        2.7 轉(zhuǎn)化擬南芥的篩選
三 結(jié)果
    1 基因克隆
        1.1 PCR擴(kuò)增
        1.2 克隆結(jié)果測序分析
    2 生物信息學(xué)分析
        2.1 系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建
        2.2 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測
        2.3 MfNAC63蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)預(yù)測
        2.4 MfNAC63蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)預(yù)測
        2.5 MfNAC63蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu)預(yù)測
        2.6 MfNAC63蛋白質(zhì)疏水性預(yù)測
        2.7 MfNAC63的信號肽及跨膜結(jié)構(gòu)域預(yù)測
        2.8 MfNAC63亞細(xì)胞定位預(yù)測
    3 亞細(xì)胞定位驗證
        3.1 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.2 轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌GV3101感受態(tài)細(xì)胞
        3.3 MfNAC63亞細(xì)胞定位結(jié)果
    4 轉(zhuǎn)錄激活功能驗證
        4.1 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        4.2 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化酵母菌AH109
        4.3 MfNAC63轉(zhuǎn)錄激活功能驗證
    5 MfNAC63基因表達(dá)分析
    6 遺傳轉(zhuǎn)化
        6.1 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        6.2 轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌AGL1結(jié)果
        6.3 轉(zhuǎn)化紫花苜蓿
        6.4 花序浸染法轉(zhuǎn)化擬南芥
四 討論與結(jié)論
    1 討論
    2 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3838247