本文關(guān)鍵詞：VEGF、L-蛋氨酸對(duì)絨山羊次級(jí)毛囊外根鞘細(xì)胞增殖和分化的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：本研究旨在研究陜北白絨山羊毛囊外根鞘細(xì)胞的體外培養(yǎng),并通過(guò)在培養(yǎng)液中分別添加VEGF和L-蛋氨酸,檢測(cè)它們對(duì)次級(jí)毛囊外根鞘細(xì)胞的增殖、分化的影響,以及VEGF對(duì)次級(jí)毛囊外根鞘細(xì)胞中FGF5 mRNA表達(dá)量的影響,來(lái)闡述外根鞘細(xì)胞在次級(jí)毛囊周期中的作用,為進(jìn)一步研究絨山羊次級(jí)毛囊發(fā)育機(jī)制提供理論支持。采集陜北白絨山羊體側(cè)部皮膚,通過(guò)剪碎、消化、剝離等方法分離初、次級(jí)毛囊,再將分離出的毛囊消化得到外根鞘細(xì)胞,并置于在37℃、5%CO2飽和濕度條件下培養(yǎng);選用第5代次級(jí)毛囊外根鞘細(xì)胞,分別添加不同濃度血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(ascular endothelial growth factor,VEGF)和L-蛋氨酸,分別處理24 h、48 h,噻唑蘭比色法(Methyl thiazolte trazoliu,MTT)檢測(cè)VEGF和L-蛋氨酸對(duì)細(xì)胞活力的影響,EdU核酸標(biāo)記技術(shù)檢測(cè)VEGF和L-蛋氨酸對(duì)細(xì)胞增殖的影響;根據(jù)GenBank公布的山羊PCNA、K10和FGF5基因cDNA序列設(shè)計(jì)引物,通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time Quantitative PCR,q-PCR)技術(shù)檢測(cè)上述三個(gè)基因在次級(jí)毛囊外根鞘細(xì)胞中的表達(dá)情況。主要研究結(jié)果如下:1.成功培養(yǎng)出了陜北白絨山羊初、次級(jí)毛囊外根鞘細(xì)胞,并利用細(xì)胞免疫熒光的方法檢測(cè)到初級(jí)外根鞘細(xì)胞的標(biāo)記基因CK17,以及次級(jí)毛囊外根鞘細(xì)胞的標(biāo)記基因CK17和CK15,免疫熒光染色結(jié)果均呈陽(yáng)性;對(duì)初、次級(jí)毛囊外根鞘細(xì)胞分別做了生長(zhǎng)曲線,均為“S”型,初、次級(jí)毛囊外根鞘細(xì)胞在形態(tài)和體積上存在一定差異。2.在培養(yǎng)液中添加VEGF可以促進(jìn)絨山羊次級(jí)毛囊外根鞘細(xì)胞的增殖,抑制細(xì)胞的分化,抑制細(xì)胞中FGF5基因的表達(dá)。當(dāng)VEGF處理濃度達(dá)到100 ng/mL時(shí),細(xì)胞活力(48 h)、增殖細(xì)胞數(shù)以及PCNA mRNA的表達(dá)量均達(dá)到最高,且均極顯著高于對(duì)照組(P0.01),細(xì)胞活力(24 h)顯著高于對(duì)照組(P0.05);VEGF處理24 h時(shí)的細(xì)胞活力和PCNA mRNA表達(dá)量的上升趨勢(shì)高于48 h。隨著濃度的增加,VEGF對(duì)細(xì)胞分化的抑制作用在增強(qiáng),當(dāng)濃度為100 ng/mL時(shí),K10 mRNA的表達(dá)量最低;隨著時(shí)間的增加,VEGF對(duì)細(xì)胞分化的抑制作用在增強(qiáng),100 ng/mL組處理48 h時(shí)的表達(dá)量顯著低于處理24 h(P0.05)。隨著濃度的增加,FGF5 mRNA在100 ng/mL組時(shí)表達(dá)量最低,并推測(cè)VEGF可以通過(guò)抑制FGF5的表達(dá)促進(jìn)毛囊生長(zhǎng)。3.在培養(yǎng)液中添加L-蛋氨酸抑制絨山羊次級(jí)毛囊外根鞘細(xì)胞的增殖和分化。處理24 h時(shí),隨著濃度的增殖,L-蛋氨酸對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用在增強(qiáng),120μg/mL時(shí)抑制作用最強(qiáng),但無(wú)顯著差異;處理48 h時(shí),隨著濃度的增加,L-蛋氨酸對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用先上升后下降,100μg/mL時(shí)抑制作用最為顯著,極顯著高于對(duì)照組(P0.01),而80μg/mL時(shí)PCNA mRNA的表達(dá)量最低,無(wú)顯著差異;48 h各組的次級(jí)毛囊外根鞘細(xì)胞的細(xì)胞活力均低于24 h。處理24 h時(shí),隨著濃度的增加,K10 mRNA的表達(dá)量也呈下降趨勢(shì),120μg/mL組表達(dá)量最低,無(wú)顯著差異;處理48 h時(shí),K10 mRNA的表達(dá)量也先下降后上升,80μg/mL組表達(dá)量最低,無(wú)顯著差異;過(guò)高濃度的L-蛋氨酸(120μg/mL)對(duì)次級(jí)毛囊外根鞘細(xì)胞增殖和分化的抑制效果均有所減弱。綜合以上試驗(yàn)結(jié)果,表明首次成功的培養(yǎng)出了陜北白絨山羊初、次級(jí)毛囊外根鞘細(xì)胞;VEGF能夠促進(jìn)次級(jí)毛囊外根鞘細(xì)胞的增殖,抑制細(xì)胞的分化,且抑制次級(jí)毛囊外根鞘細(xì)胞中FGF5基因的表達(dá);L-蛋氨酸抑制對(duì)次級(jí)毛囊外根鞘細(xì)胞的增殖和分化。
【關(guān)鍵詞】：陜北白絨山羊 次級(jí)毛囊 外根鞘細(xì)胞 VEGF L-蛋氨酸
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S827
【目錄】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-12
• 第一章 毛囊發(fā)育研究進(jìn)展12-22
• 1.1 毛囊的基本結(jié)構(gòu)12-14
• 1.2 毛囊的發(fā)育及調(diào)控14-16
• 1.3 毛囊的周期及相關(guān)分子調(diào)控16-18
• 1.4 VEGF在毛囊中作用的研究進(jìn)展18-19
• 1.5 L-蛋氨酸對(duì)毛囊發(fā)育的影響19-20
• 1.6 本研究的目的和意義20-22
• 第二章 絨山羊毛囊外根鞘細(xì)胞的體外培養(yǎng)22-29
• 2.1 材料與方法22-24
• 2.1.1 材料22-23
• 2.1.2 試驗(yàn)方法23-24
• 2.2 結(jié)果與分析24-27
• 2.2.1 絨山羊毛囊外根鞘細(xì)胞的體外培養(yǎng)24-25
• 2.2.2 初級(jí)毛囊和次級(jí)毛囊外根鞘細(xì)胞的鑒定25-26
• 2.2.3 初級(jí)毛囊和次級(jí)毛囊外根鞘細(xì)胞生長(zhǎng)曲線26-27
• 2.3 討論27-28
• 2.4 小結(jié)28-29
• 第三章 VEGF對(duì)次級(jí)毛囊外根鞘細(xì)胞增殖和分化的影響29-37
• 3.1 材料與方法29-31
• 3.1.1 材料29
• 3.1.2 試驗(yàn)方法29-31
• 3.2 結(jié)果分析31-34
• 3.2.1 MTT法檢測(cè)次級(jí)毛囊外根鞘細(xì)胞的增殖31
• 3.2.2 EdU檢測(cè)次級(jí)毛囊外根鞘細(xì)胞的增殖31-32
• 3.2.3 PCNA、K10基因在次級(jí)毛囊外根鞘細(xì)胞中的表達(dá)32-33
• 3.2.4 FGF5基因在次級(jí)毛囊外根鞘細(xì)胞中的表達(dá)33-34
• 3.3 討論34-35
• 3.4 小結(jié)35-37
• 第四章 L-蛋氨酸對(duì)次級(jí)毛囊外根鞘細(xì)胞增殖和分化的影響37-43
• 4.1 材料與方法37-38
• 4.1.1 材料37
• 4.1.2 試驗(yàn)方法37-38
• 4.2 結(jié)果分析38-41
• 4.2.1 MTT法檢測(cè)次級(jí)毛囊外根鞘細(xì)胞的增殖38-39
• 4.2.2 EdU檢測(cè)次級(jí)毛囊外根鞘細(xì)胞的增殖39-40
• 4.2.3 PCNA、K10基因在次級(jí)毛囊外根鞘細(xì)胞中的表達(dá)40-41
• 4.3 討論41-42
• 4.4 小結(jié)42-43
• 第五章 結(jié)論43-44
• 5.1 結(jié)論43
• 5.2 創(chuàng)新點(diǎn)43
• 5.3 展望43-44
• 參考文獻(xiàn)44-50
• 附錄50-53
• 致謝53-54
• 作者簡(jiǎn)介54

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  本文關(guān)鍵詞：VEGF、L-蛋氨酸對(duì)絨山羊次級(jí)毛囊外根鞘細(xì)胞增殖和分化的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：383200