腸出血性大腸桿菌(Enterohaemorrhagic Escherichia coli, EHEC)0157:H7是一種重要的人獸共患病原菌,通過(guò)食源、水源等途徑感染人類(lèi),導(dǎo)致嚴(yán)重的腹瀉、出血性腸炎(Hemorrhagic Colitis,HC),溶血性尿毒癥綜合征(Hemolytic Uremic Syndrome,HUS)甚至血栓性血小板減少性紫癜(Thrombotic Thrombocytopenic Purpura,TTP)動(dòng)物源性是EHEC O157:H7的重要特征。反芻動(dòng)物(主要為牛)是EHEC0157：H7主要儲(chǔ)存宿主,其次豬、羊、馬、狗、鵝、兔、雞、魚(yú)及鹿等均有病原菌感染和分離的報(bào)道。感染動(dòng)物主要通過(guò)排泄物污染食物、水源和環(huán)境,進(jìn)而導(dǎo)致人類(lèi)感染。人感染后,抗生素治療會(huì)促進(jìn)志賀毒素的快速釋放,加速病情惡化,引起嚴(yán)重后果。因此,期待人類(lèi)獲得免疫力,而抵抗EHEC O157:H7的感染,目前不切實(shí)際。研制特異、快速而便捷的批量檢測(cè)技術(shù),顯得至關(guān)重要。緊密素intimin)是EHEC(Enterohaemorrhagic E.coli)、EPEC (Enteroparhoge...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略表(Abbreviation)
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    1. EHEC O157：H7的主要毒力因子
        1.1 緊密素
        1.2 志賀毒素
        1.3 溶血素和致病性質(zhì)粒編碼的其他毒力基因
        1.4 脂多糖（Lipopolysaccharide, LPS）
    2 O157：H7的流行病學(xué)
        2.1 流行病學(xué)特點(diǎn)
        2.2 流行情況
    3 臨床特征
    4 致病機(jī)制
        4.1 A/E損傷
        4.2 產(chǎn)生志賀毒素和溶血素
        4.3 炎癥
    5 EHEC O157：H7檢測(cè)方法
        5.1 常規(guī)性檢測(cè)方法
        5.2 血清學(xué)檢測(cè)方法
        5.3 免疫學(xué)檢測(cè)
        5.4 分子生物學(xué)檢測(cè)方法
    6 防控策略
    參考文獻(xiàn)
第二篇 試驗(yàn)研究
    第一章 EHEC O157：H7緊密素(intimin)單克隆抗體的制備與鑒定
        1 材料
            1.1 菌株
            1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及細(xì)胞
            1.3 試驗(yàn)主要試劑和儀器
        2 方法
            2.1 抗原的制備
            2.2 免疫動(dòng)物
            2.3 細(xì)胞融合
            2.4 間接ELISA最佳抗原包被濃度和血清稀釋倍數(shù)的確定
            2.5 陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞株的篩選
            2.6 陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞的克隆化
            2.7 陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞的凍存和復(fù)蘇
            2.8 MAb腹水的制備
            2.9 間接ELISA方法檢測(cè)單克隆抗體特異性及單抗對(duì)EHEC O157：H7的初步檢測(cè)
            2.10 單克隆抗體活性鑒定
            2.11 雜交瘤細(xì)胞分泌抗體的穩(wěn)定性鑒定
            2.12 腹水敏感性測(cè)定
        3 結(jié)果
            3.1 Intimin重組蛋白的表達(dá)、純化
            3.2 細(xì)胞融合率、陽(yáng)性率與細(xì)胞克隆
            3.3 間接ELISA方法的建立
            3.4 間接ELISA方法檢測(cè)單克隆抗體特異性及單抗對(duì)EHEC O157：H7的初步檢測(cè)
            3.5 單抗對(duì)intimin最小檢出限的初步測(cè)定
            3.6 Western-blot檢測(cè)
        4 討論
        參考文獻(xiàn)
    第二章 EHEC O157雙抗體夾心ELISA檢測(cè)方法的建立
        1 材料
            1.1 菌株與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.2 抗體
            1.3 主要試劑及儀器
        2 方法
            2.1 兔抗EHEC O157：H7高免血清制備
            2.2 兔抗EHEC O157：H7高免血清的純化
            2.3 提純腹水、多抗效價(jià)和濃度測(cè)定
            2.4 雙抗體夾心ELISA方法最適反應(yīng)條件的確定
            2.5 特異性試驗(yàn)
            2.6 敏感性試驗(yàn)
            2.7 重復(fù)性試驗(yàn)
            2.8 陰陽(yáng)臨界值的確定
        3 結(jié)果
            3.1 兔抗高免血清效價(jià)、純度及濃度測(cè)定
            3.2 雙夾心ELISA方法最適反應(yīng)條件的確定
            3.3 特異性試驗(yàn)
            3.4 敏感性試驗(yàn)
            3.5 重復(fù)性試驗(yàn)
            3.6 陰陽(yáng)臨界值的確定
        4 討論
        參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)
附錄：常用試劑的配制
碩士期間發(fā)表文章
致謝



本文編號(hào)：3829258