小反芻獸疫（PPR）是由小反芻獸疫病毒（PPRV）引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，主要感染山羊和綿羊，具有高發(fā)病率和致死率的特點。該病目前主要流行于撒哈拉以南的非洲、中東地區(qū)和印度次大陸。由于PPR的高致死率(70–80%)，OIE將其列為必須上報的動物傳染病。 PPRV基因組為單股負鏈RNA，全長為15,948nt，其基因組共編碼6種結(jié)構(gòu)蛋白(N, P, M, F,H和L)和兩種非結(jié)構(gòu)蛋白（C和V）。H蛋白和F蛋白是囊膜上的兩種糖蛋白，是病毒對于宿主的重要保護性抗原，能激發(fā)宿主產(chǎn)生中和抗體和保護性細胞免疫應答，是最適合應用于疫苗的兩種蛋白。細胞免疫在機體對病毒的清除過程中發(fā)揮著不可或缺的作用，因此對H和F蛋白的細胞表位進行篩選對小反芻獸疫預防和控制意義重大。 本實驗具體進行了如下研究： 1PPRV H蛋白膜外區(qū)的原核表達 利用原核表達系統(tǒng)對PPRV H蛋白的膜外區(qū)部分進行了表達，并對重組蛋白進行了純化和western-blotting分析。結(jié)果顯示，H蛋白膜外區(qū)部分得到了高效的表達，SDS-PAGE分析其大小為60ku左右，western-blotting分析證明其具有較好的...

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【學位級別】：碩士

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摘要
Abstract
第一章 小反芻獸疫的研究進展
    1.1 引言
    1.2 病原學
        1.2.1 病毒的形態(tài)和理化特性
        1.2.2 病毒基因組和蛋白
        1.2.3 病毒的致病機理
    1.3 流行病學
        1.3.1 分布和流行地域
        1.3.2 易感動物
    1.4 疫苗學研究進展
        1.4.1 PPRV 野毒的馴化和弱毒疫苗的篩選
        1.4.2 小反芻獸疫疫苗
        1.4.3 展望
第二章 小反芻獸疫病毒 H 蛋白膜外區(qū)的表達與分析
    2.1 材料
        2.1.1 質(zhì)粒與菌株
        2.1.2 試劑與溶液
    2.2 方法
        2.2.1 重組表達質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化
        2.2.2 重組表達質(zhì)粒的鑒定
        2.2.3 重組大腸桿菌的誘導表達
        2.2.4 重組蛋白的純化
        2.2.5 純化的重組 tH 蛋白的 SDS-PAGE 分析和定量
        2.2.6 純化的重組 tH 蛋白的 western-blotting 分析
        2.2.7 小反芻獸疫病毒 H 蛋白的生物信息學分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 重組表達質(zhì)粒的鑒定
        2.3.2 重組大腸桿菌的誘導表達
        2.3.3 純化的重組 tH 蛋白的 SDS-PAGE 分析
        2.3.4 純化的重組 tH 蛋白的定量
        2.3.5 純化的重組 tH 蛋白的 western-blotting 分析
        2.3.6 小反芻獸疫病毒 H 蛋白的生物信息學分析
    2.4 討論
第三章 小反芻獸疫間接 ELISA 檢測方法的建立
    3.1 材料
        3.1.1 包被抗原、PPRV 陽性血清及陰性血清
        3.1.2 主要試劑與材料
        3.1.3 溶液
    3.2 方法
        3.2.1 間接 ELISA 檢測方法具體操作步驟
        3.2.2 間接 ELISA 檢測方法條件優(yōu)化
        3.2.3 陰性樣品臨界值的確定
        3.2.4 敏感性試驗
        3.2.5 重復性試驗
        3.2.6 特異性試驗
        3.2.7 臨床樣品檢測中的應用
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 間接 ELISA 各最佳工作條件的確定
        3.3.2 判定標準的確定
        3.3.3 敏感性試驗
        3.3.4 重復性試驗
        3.3.5 特異性試驗
        3.3.6 臨床樣品監(jiān)測中的應用
    3.4 討論
第四章 小反芻獸疫病毒 H 和 F 蛋白 CTL 細胞表位的篩選與鑒定
    4.1 材料
    4.2 方法
        4.2.1 小鼠免疫與免疫效果的檢測
        4.2.2 PPRV H 和 F 蛋白 CTL 細胞表位的生物信息學預測和合成
        4.2.3 小鼠淋巴細胞的分離
        4.2.4 小鼠淋巴細胞的計數(shù)
        4.2.5 H 和 F 蛋白 CTL 表位的 ELISPOT 鑒定
        4.2.6 H 和 F 蛋白 CTL 表位的 ICS 鑒定
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 PPRV H 和 F 蛋白 CTL 細胞表位的生物信息學預測
        4.3.2 小鼠免疫效果檢測
        4.3.3 小鼠淋巴細胞的分離制備及計數(shù)結(jié)果
        4.3.4 H 和 F 蛋白 CTL 表位的 ELISPOT 鑒定結(jié)果
        4.3.5 H 和 F 蛋白 CTL 表位的 ICS 鑒定結(jié)果
    4.4 討論
第五章 全文結(jié)論
參考文獻
致謝
作者簡介



本文編號：3825300