紅斑丹毒絲菌是造成動物丹毒病和人類類丹毒病的病原體。所有動物丹毒病中豬丹毒的經(jīng)濟意義最大。目前研究認為紅斑丹毒絲菌對血管內(nèi)皮細胞的粘附是感染發(fā)病起始環(huán)節(jié)的關鍵,但是紅斑丹毒絲菌的毒力因子和致病機制依然不很清楚。本研究比較系統(tǒng)地研究了紅斑丹毒絲菌致病表型。研究了GAPDH等5個紅斑丹毒絲菌表面蛋白的致病作用,評估了這5個蛋白作為保護性抗原的潛質(zhì)。最后,我們建立和改進了區(qū)分紅斑丹毒絲菌疫苗菌株和野生型菌株的方法。本研究結果表明:紅斑丹毒絲菌可以粘附血管內(nèi)皮細胞,且強毒菌株表現(xiàn)出更高的粘附活性。紅斑丹毒絲菌不能直接損傷血管內(nèi)皮細胞。紅斑丹毒絲菌能夠利用宿主的血漿纖維蛋白溶解酶原和纖維連接蛋白,強毒菌株表現(xiàn)出更高的招募活性。紅斑丹毒絲菌具有抵抗全血殺傷能力且強毒菌株表現(xiàn)出更強的抵抗能力。紅斑丹毒絲菌強毒菌株的占優(yōu)勢的免疫反應是Th1型反應。本研究克隆、表達、純化了5個紅斑丹毒絲菌表面蛋白:Spa A、Cbp B、GAPDH、HP0728、HP1472。研究結果顯示它們都定位于紅斑丹毒絲菌菌體表面。我們的研究結果顯示表面蛋白Spa A、Cbp B、GAPDH、HP1472可以在紅斑丹毒絲菌粘附血...

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【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞
1 文獻綜述
    1.1 紅斑丹毒絲菌研究進展
        1.1.1 微生物學特性
        1.1.2 豬丹毒及其他動物的丹毒病
        1.1.3 人類紅斑丹毒絲菌感染
    1.2 紅斑丹毒絲菌毒力因子和致病機制
        1.2.1 已知的毒力因子和致病機制
        1.2.2 相關領域研究進展
    1.3 丹毒疫苗研究進展
        1.3.1 傳統(tǒng)疫苗
        1.3.2 弱毒疫苗和野生型菌株的鑒別診斷
        1.3.3 新型疫苗研究進展
    1.4 本研究的內(nèi)容與目標
2 紅斑丹毒絲菌致病性表型研究
    2.1 材料與方法
        2.1.1 菌株、細胞系及培養(yǎng)條件
        2.1.2 小鼠致病性實驗
        2.1.3 細胞粘附實驗
        2.1.4 細胞毒性試驗
        2.1.5 血漿纖維蛋白溶解酶原招募活性檢測
        2.1.6 粘附促進實驗
        2.1.7 招募plasminogen和fibronectin能力比較
        2.1.8 全血殺菌實驗
        2.1.9 血清制備和IgG1/IG2a類型檢測
        2.1.10 統(tǒng)計分析
    2.2 結果
        2.2.1 小鼠致病性實驗
        2.2.2 豬髖動脈血管內(nèi)皮細胞粘附實驗
        2.2.3 細胞毒性實驗
        2.2.4 招募血漿纖維蛋白溶解酶原的活性檢測
        2.2.5 血漿纖維蛋白溶解酶原和纖維連接蛋白的粘附促進實驗
        2.2.6 招募血漿纖維蛋白溶解酶原和纖維連接蛋白能力的比較
        2.2.7 全血殺菌實驗
        2.2.8 IgG1/IgG2a類型測定
    2.3 討論
3 GAPDH等紅斑丹毒絲菌表面蛋白的致病作用研究
    3.1 材料和方法
        3.1.1 菌株、細胞系和培養(yǎng)條件
        3.1.2 待研究的紅斑丹毒絲菌表面蛋白的篩選
        3.1.3 克隆、表達和純化重組的紅斑丹毒絲菌表面蛋白
        3.1.4 重組GAPDH活性測定
        3.1.5 制備多克隆血清
        3.1.6 紅斑丹毒絲菌表面蛋白分布測定
        3.1.7 豬髖動脈血管內(nèi)皮細胞粘附實驗
        3.1.8 競爭粘附抑制實驗
        3.1.9 血漿纖維蛋白溶解酶原和纖維連接蛋白綁定活性檢測
    3.2 結果
        3.2.1 紅斑丹毒絲菌致病性相關表面蛋白的篩選
        3.2.2 蛋白的克隆、表達和純化
        3.2.3 rGAPDH的酶活性
        3.2.4 表面定位檢測
        3.2.5 重組表面蛋白對豬血管內(nèi)皮細胞的粘附
        3.2.6 競爭粘附抑制實驗
        3.2.7 血漿纖維蛋白溶解酶原和纖維連接蛋白結合活性
    3.3 討論
        3.3.1 SpaA的致病作用
        3.3.2 CbpB的致病作用
        3.3.3 GAPDH的致病作用
        3.3.4 HP0728的致病作用
        3.3.5 HP1472的致病作用
        3.3.6 未來應該做的工作
        3.3.7 小結
4 GAPDH等紅斑丹毒絲菌表面蛋白的保護力研究
    4.1 重組紅斑丹毒絲菌表面蛋白的保護力
        4.1.1 材料與方法
        4.1.2 結果
        4.1.3 討論
    4.2 對GAPDH作為廣譜疫苗的評估
        4.2.1 材料與方法
        4.2.2 結果
        4.2.3 討論
5 紅斑丹毒絲菌疫苗弱和野毒菌株鑒別診斷方法的建立
    5.1 基于SNP區(qū)分豬丹毒疫苗株和野毒株的PCR方法的修正
        5.1.1 材料與方法
        5.1.2 結果
        5.1.3 討論
    5.2 區(qū)分豬丹毒疫苗菌株和野生型菌株的雙重PCR方法的建立
        5.2.1 材料與方法
        5.2.2 結果
        5.2.3 討論
6 總結
參考文獻
附錄
研究生期間的論文與專利
致謝



本文編號：3824597