紅斑丹毒絲菌是造成動(dòng)物丹毒病和人類類丹毒病的病原體。所有動(dòng)物丹毒病中豬丹毒的經(jīng)濟(jì)意義最大。目前研究認(rèn)為紅斑丹毒絲菌對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的粘附是感染發(fā)病起始環(huán)節(jié)的關(guān)鍵,但是紅斑丹毒絲菌的毒力因子和致病機(jī)制依然不很清楚。本研究比較系統(tǒng)地研究了紅斑丹毒絲菌致病表型。研究了GAPDH等5個(gè)紅斑丹毒絲菌表面蛋白的致病作用,評(píng)估了這5個(gè)蛋白作為保護(hù)性抗原的潛質(zhì)。最后,我們建立和改進(jìn)了區(qū)分紅斑丹毒絲菌疫苗菌株和野生型菌株的方法。本研究結(jié)果表明:紅斑丹毒絲菌可以粘附血管內(nèi)皮細(xì)胞,且強(qiáng)毒菌株表現(xiàn)出更高的粘附活性。紅斑丹毒絲菌不能直接損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞。紅斑丹毒絲菌能夠利用宿主的血漿纖維蛋白溶解酶原和纖維連接蛋白,強(qiáng)毒菌株表現(xiàn)出更高的招募活性。紅斑丹毒絲菌具有抵抗全血?dú)芰η覐?qiáng)毒菌株表現(xiàn)出更強(qiáng)的抵抗能力。紅斑丹毒絲菌強(qiáng)毒菌株的占優(yōu)勢(shì)的免疫反應(yīng)是Th1型反應(yīng)。本研究克隆、表達(dá)、純化了5個(gè)紅斑丹毒絲菌表面蛋白:Spa A、Cbp B、GAPDH、HP0728、HP1472。研究結(jié)果顯示它們都定位于紅斑丹毒絲菌菌體表面。我們的研究結(jié)果顯示表面蛋白Spa A、Cbp B、GAPDH、HP1472可以在紅斑丹毒絲菌粘附血...

【文章頁(yè)數(shù)】：97 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 紅斑丹毒絲菌研究進(jìn)展
        1.1.1 微生物學(xué)特性
        1.1.2 豬丹毒及其他動(dòng)物的丹毒病
        1.1.3 人類紅斑丹毒絲菌感染
    1.2 紅斑丹毒絲菌毒力因子和致病機(jī)制
        1.2.1 已知的毒力因子和致病機(jī)制
        1.2.2 相關(guān)領(lǐng)域研究進(jìn)展
    1.3 丹毒疫苗研究進(jìn)展
        1.3.1 傳統(tǒng)疫苗
        1.3.2 弱毒疫苗和野生型菌株的鑒別診斷
        1.3.3 新型疫苗研究進(jìn)展
    1.4 本研究的內(nèi)容與目標(biāo)
2 紅斑丹毒絲菌致病性表型研究
    2.1 材料與方法
        2.1.1 菌株、細(xì)胞系及培養(yǎng)條件
        2.1.2 小鼠致病性實(shí)驗(yàn)
        2.1.3 細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)
        2.1.4 細(xì)胞毒性試驗(yàn)
        2.1.5 血漿纖維蛋白溶解酶原招募活性檢測(cè)
        2.1.6 粘附促進(jìn)實(shí)驗(yàn)
        2.1.7 招募plasminogen和fibronectin能力比較
        2.1.8 全血?dú)⒕鷮?shí)驗(yàn)
        2.1.9 血清制備和IgG1/IG2a類型檢測(cè)
        2.1.10 統(tǒng)計(jì)分析
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 小鼠致病性實(shí)驗(yàn)
        2.2.2 豬髖動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)
        2.2.3 細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)
        2.2.4 招募血漿纖維蛋白溶解酶原的活性檢測(cè)
        2.2.5 血漿纖維蛋白溶解酶原和纖維連接蛋白的粘附促進(jìn)實(shí)驗(yàn)
        2.2.6 招募血漿纖維蛋白溶解酶原和纖維連接蛋白能力的比較
        2.2.7 全血?dú)⒕鷮?shí)驗(yàn)
        2.2.8 IgG1/IgG2a類型測(cè)定
    2.3 討論
3 GAPDH等紅斑丹毒絲菌表面蛋白的致病作用研究
    3.1 材料和方法
        3.1.1 菌株、細(xì)胞系和培養(yǎng)條件
        3.1.2 待研究的紅斑丹毒絲菌表面蛋白的篩選
        3.1.3 克隆、表達(dá)和純化重組的紅斑丹毒絲菌表面蛋白
        3.1.4 重組GAPDH活性測(cè)定
        3.1.5 制備多克隆血清
        3.1.6 紅斑丹毒絲菌表面蛋白分布測(cè)定
        3.1.7 豬髖動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)
        3.1.8 競(jìng)爭(zhēng)粘附抑制實(shí)驗(yàn)
        3.1.9 血漿纖維蛋白溶解酶原和纖維連接蛋白綁定活性檢測(cè)
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 紅斑丹毒絲菌致病性相關(guān)表面蛋白的篩選
        3.2.2 蛋白的克隆、表達(dá)和純化
        3.2.3 rGAPDH的酶活性
        3.2.4 表面定位檢測(cè)
        3.2.5 重組表面蛋白對(duì)豬血管內(nèi)皮細(xì)胞的粘附
        3.2.6 競(jìng)爭(zhēng)粘附抑制實(shí)驗(yàn)
        3.2.7 血漿纖維蛋白溶解酶原和纖維連接蛋白結(jié)合活性
    3.3 討論
        3.3.1 SpaA的致病作用
        3.3.2 CbpB的致病作用
        3.3.3 GAPDH的致病作用
        3.3.4 HP0728的致病作用
        3.3.5 HP1472的致病作用
        3.3.6 未來(lái)應(yīng)該做的工作
        3.3.7 小結(jié)
4 GAPDH等紅斑丹毒絲菌表面蛋白的保護(hù)力研究
    4.1 重組紅斑丹毒絲菌表面蛋白的保護(hù)力
        4.1.1 材料與方法
        4.1.2 結(jié)果
        4.1.3 討論
    4.2 對(duì)GAPDH作為廣譜疫苗的評(píng)估
        4.2.1 材料與方法
        4.2.2 結(jié)果
        4.2.3 討論
5 紅斑丹毒絲菌疫苗弱和野毒菌株鑒別診斷方法的建立
    5.1 基于SNP區(qū)分豬丹毒疫苗株和野毒株的PCR方法的修正
        5.1.1 材料與方法
        5.1.2 結(jié)果
        5.1.3 討論
    5.2 區(qū)分豬丹毒疫苗菌株和野生型菌株的雙重PCR方法的建立
        5.2.1 材料與方法
        5.2.2 結(jié)果
        5.2.3 討論
6 總結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄
研究生期間的論文與專利
致謝



本文編號(hào)：3824597