為了同時(shí)檢測(cè)奶牛乳房炎多種病原菌,試驗(yàn)采用金黃色葡萄球菌(S.aureus)nuc基因、牛支原體(M.bovis)oppD/F基因、大腸桿菌(E.coli)16S-23S rRNA基因內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)作為靶標(biāo)設(shè)計(jì)3對(duì)特異性引物,在優(yōu)化單菌退火溫度的基礎(chǔ)上確定多重PCR的退火溫度,建立S.aureus、M.bovis和E.coli的多重PCR檢測(cè)方法,驗(yàn)證多重PCR的重復(fù)性、特異性、敏感性及實(shí)用性。結(jié)果表明:基于單一PCR三者共同的最佳退火溫度(55.3℃、56.5℃、57.8℃)優(yōu)化多重PCR退火溫度,最終確定57.8℃為三者最佳的退火溫度。該方法能擴(kuò)增出長(zhǎng)度為237 bp(S.aureus)、333 bp(M.bovis)、634 bp(E.coli)的基因片段;靶標(biāo)菌特異性擴(kuò)增而非靶標(biāo)菌無擴(kuò)增條帶,最低檢測(cè)濃度分別為S.aureus 1 pg/μL、M.bovis 1 pg/μL、E.coli 100 fg/μL;正常乳樣和臨床乳房炎乳樣均檢出S.aureus(25.9%、53.8%)、M.bovis(10.3%、17.9%)和E.coli(32.8%、71.8%),但乳房炎乳樣的陽性...

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【文章目錄】：
1 材料
    1.1 菌株及乳樣
    1.2 主要試劑
2 方法
    2.1 病原菌單一PCR條件的優(yōu)化及重復(fù)性檢測(cè)
    2.2 PCR產(chǎn)物的鑒定
    2.3 病原菌多重PCR方法的優(yōu)化及建立
    2.4 多重PCR方法的特異性檢測(cè)
    2.5 多重PCR方法敏感性的檢測(cè)
    2.6 多重PCR方法實(shí)用性的檢測(cè)
3 結(jié)果與分析
    3.1 金黃色葡萄球菌、牛支原體、大腸桿菌單一PCR擴(kuò)增條件的優(yōu)化、擴(kuò)增產(chǎn)物的鑒定及方法的重復(fù)性
    3.2 多重PCR方法的優(yōu)化及建立
    3.3 多重PCR 方法的特異性
    3.4 多重PCR 方法的敏感性
    3.5 多重PCR 方法的實(shí)用性
4 討論
    4.1 本研究所建立的多重PCR方法的特異性、敏感性、實(shí)用性
    4.2 正常乳樣中存在病原菌的原因分析



本文編號(hào)：3824602