由豬鏈球菌2型(Streptococcus suis serotype2, S.suis2, SS2)引起的豬鏈球菌病是一種重要的人畜共患傳染病,可導(dǎo)致豬的腦膜炎、心內(nèi)膜炎、漿膜炎、關(guān)節(jié)炎、肺炎和敗血癥等。2005年中國四川暴發(fā)的豬鏈球菌病不僅給中國的養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大的損失,還給公共衛(wèi)生安全造成很大的威脅。因此,豬鏈球菌2型的致病機制成了國內(nèi)外學(xué)者研究的熱點。目前已經(jīng)報道的SS2的毒力(相關(guān))因子有：莢膜多糖CPS、溶菌酶釋放蛋白MRP和細胞外因子EF、溶血素Sly、纖連蛋白結(jié)合蛋白FBPS、血清渾濁因子OSF、89K毒力島和雙組份調(diào)控系統(tǒng)等。 目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了15對豬鏈球菌2型的雙組份調(diào)控系統(tǒng)如：CiaRH、SalK/SalR、 RevS和2148hk/rr等。CiaRH是肺炎鏈球菌中發(fā)現(xiàn)的第一對雙組份調(diào)控系統(tǒng),它不僅能對單一信號產(chǎn)生強烈反應(yīng),而且在各種條件下都能保持高水平的基因表達。CiaRH參與的反應(yīng)過程有：感受態(tài)的形成、宿主定植、自溶、細菌素的產(chǎn)生和毒力等。同時CiaRH還參與生物被膜的形成,生物被膜在抗生素的耐受和細菌的免疫逃避方面發(fā)揮重要作用。 本課題組李錦銓博士通過構(gòu)建Ci...

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表
1.前言
    1.1 豬鏈球菌2型(SS2)的研究進展
        1.1.1 豬鏈球菌2型的病原學(xué)及流行病學(xué)特征
        1.1.2 豬鏈球菌2型毒力因子的研究進展
    1.2 雙組份調(diào)控系統(tǒng)的研究
        1.2.1 雙組份調(diào)控系統(tǒng)CiaRH的研究
        1.2.2 CiaR調(diào)控的啟動子中的csRNAs
        1.2.3 CiaRH的調(diào)控機制
        1.2.4 CiaRH對病原菌的毒力的作用
        1.2.5 CiaRH對生物被膜的影響
    1.3 細菌生物被膜的研究進展
        1.3.1 病原菌生物被膜生成的相關(guān)影響因素
        1.3.2 病原菌生物被膜與毒力的關(guān)系
        1.3.3 病原菌生物被膜的致病機制
    1.4 SSU05₂039和SSU05₂036基因功能的研究進展
        1.4.1 SSU05₂039基因功能研究
        1.4.2 SSU05₂036基因功能研究
2.研究目的與意義
3.材料與方法
    3.1 材料
        3.1.1 菌株、質(zhì)粒和培養(yǎng)條件
        3.1.2 動物和細胞
        3.1.3 主要藥品、試劑、試劑盒與儀器
        3.1.4 主要培養(yǎng)基及抗生素配制
        3.1.5 主要溶液配制
        3.1.6 引物
    3.2 實驗方法
        3.2.1 RNA的提取
        3.2.2 反轉(zhuǎn)錄PCR
        3.2.3 實時熒光定量PCR(Real-time PCR)
        3.2.4 蛋白質(zhì)的誘導(dǎo)表達
        3.2.5 蛋白質(zhì)的鑒定(SDS-PAGE)
        3.2.6 蛋白純化
        3.2.7 蛋白質(zhì)濃度的測定
        3.2.8 電泳遷移率實驗(EMSA)
        3.2.9 豬鏈球菌2型的電轉(zhuǎn)化
        3.2.10 突變株的篩選與鑒定
            3.2.10.1 重組質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
            3.2.10.2 突變株的構(gòu)建與鑒定
            3.2.10.3 突變株△CiaRH的鑒定
        3.2.11 突變株生物學(xué)特性的研究
            3.2.11.1 生長曲線的測定
            3.2.11.2 溶血活性的比較
        3.2.12 96孔板結(jié)晶紫染色法
        3.2.13 小鼠的半數(shù)致死量(LD₅₀)實驗(寇氏(Korbor)法)
        3.2.14 小鼠組織載菌量的測定
        3.2.15 吞噬實驗(小鼠巨噬細胞RAW264.7)
4.實驗結(jié)果與分析
    4.1 突變株△CiaRH的鑒定及調(diào)控基因的篩選
        4.1.1 突變株△CiaRH的驗證
        4.1.2 表達譜芯片篩選調(diào)控基因及SSU05₂036基因的重新命名
        4.1.3 凝膠電泳遷移率(EMSA)體外結(jié)合試驗結(jié)果分析
        4.1.4 熒光定量驗證(Real-Time PCR)
    4.2 突變株△SSU05₂039和△SSU05₂036的重組質(zhì)粒構(gòu)建及篩選
        4.2.1 △SSU05₂039和△SSU05₂036的重組質(zhì)粒構(gòu)建
        4.2.2 突變株△SSU05₂039和△SSU05₂036的篩選與鑒定
    4.3 突變株△SSU05₂036和△SSU05₂039的生物學(xué)特性研究
        4.3.1 生長曲線的測定
        4.3.2 溶血活性測定
    4.4 生物被膜結(jié)果分析
    4.5 突變株△SSU05₂036和△SSU05₂039對小鼠致病力的影響
        4.5.1 小鼠LD₅₀(半數(shù)致死量)的測定
        4.5.2 組織載菌量的結(jié)果分析
    4.6 吞噬實驗結(jié)果分析
5.討論
    5.1 突變株的構(gòu)建
    5.2 CiaRH的調(diào)控基因SSU05₂036和SSU05₂039對生物被膜的影響可能的機制
    5.3 吞噬試驗結(jié)果討論
    5.4 CiaRH調(diào)控基因SSU05₂036和SSU05₂039的后續(xù)研究展望
6.結(jié)論
參考文獻
致謝



本文編號：3997943