為建立能同時檢測牛冠狀病毒(bovine coronavirus,BCoV)、牛諾如病毒(bovine norovirus,BNoV)和牛嵴病毒(bovine kobuvirus,BKV)的方法,根據(jù)BCoV、BNoV和BKV基因組的保守區(qū)域設(shè)計3對特異性引物,預(yù)期特異性擴(kuò)增BCoV、BNoV和BKV的片段大小分別為896,542,216 bp,建立了BCoV、BNoV和BKV的多重PCR檢測方法。特異性檢測結(jié)果顯示,該方法能特異性擴(kuò)增BCoV、BNoV和BKV的目的條帶,且未擴(kuò)增出其他犢牛腹瀉(calf diarrhea,CD)病原;BCoV、BNoV和BKV的最低檢測限分別為9.51×10⁵,5.39×10⁵,2.23×10⁶ copies/μL。對采集自河南部分地區(qū)的127份CD樣品的檢測結(jié)果顯示,BCoV的陽性率為14.96%(19/127),BNoV的陽性率為6.30%(8/127),BKV的陽性率為4.72%(6/127),三者與單一PCR檢測結(jié)果相一致。結(jié)果表明,本研究建立的多重PCR方法可用于BCoV、B...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試驗(yàn)材料
    1.2 核酸提取
    1.3 引物設(shè)計與合成
    1.4 PCR擴(kuò)增
    1.5 特異性試驗(yàn)
    1.6 敏感性試驗(yàn)
    1.7 重復(fù)性試驗(yàn)
    1.8 應(yīng)用性試驗(yàn)
2 結(jié)果
    2.1 多重PCR體系的構(gòu)建及優(yōu)化
    2.2 特異性試驗(yàn)
    2.3 敏感性試驗(yàn)
    2.4 重復(fù)性試驗(yàn)
    2.5 應(yīng)用性檢測
3 討論



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