本文關(guān)鍵詞：綿羊白介素1β及其受體拮抗因子熒光定量PCR檢測方法的建立與應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：白介素1β(IL-1β)和白介素1受體拮抗因子(IL-1Ra)是白介素1家族的兩種重要成員。白介素1家族不僅是先天免疫系統(tǒng)的重要組成部分,而且對后天免疫系統(tǒng)也起到調(diào)節(jié)作用。IL-1β可以協(xié)同一些細(xì)胞因子來刺激T、B細(xì)胞分化,由于IL-1Ra與IL-1β三維結(jié)構(gòu)相似,IL-1Ra能夠與IL-1β競爭細(xì)胞膜表面的I型白介素1受體(IL-1RI),但是IL-1Ra與IL-1RI結(jié)合不能產(chǎn)生異物二聚體進(jìn)而不能傳導(dǎo)細(xì)胞信號,從而起到拮抗IL-1β的生物學(xué)活性。研究表明,IL-1β與IL-1Ra二者之間的平衡關(guān)系與一些疾病的發(fā)生發(fā)展相關(guān),例如:關(guān)節(jié)炎、炎癥性腸病、肉芽腫及中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病等。同時(shí),本課題組前期研究發(fā)現(xiàn),綿羊白介素1β及其受體拮抗因子的差異表達(dá)與布魯氏菌等細(xì)菌感染也有一定的關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)建立綿羊白介素1β(Oa IL-1β)及其受體拮抗因子(Oa IL-1Ra)反轉(zhuǎn)錄-實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-q PCR)檢測方法,根據(jù)Oa IL-1β(Gen Bank登錄號為KC425612)及Oa IL-1Ra(Gen Bank登錄號為KC425613)的m RNA序列,設(shè)計(jì)特異性引物擴(kuò)增目的基因。將兩種目的基因分別克隆至p MD-18T載體上,得到陽性重組質(zhì)粒,以兩種陽性重組質(zhì)粒為標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒分別建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,并且進(jìn)行靈敏性、重復(fù)性和特異性分析實(shí)驗(yàn)。通過熔解曲線分析證明熒光定量PCR產(chǎn)物為特異性單峰且重復(fù)性良好。Oa IL-1β的線性關(guān)系表達(dá)式為y=-3.463 x+39.957,相關(guān)系數(shù)R2為0.9999,擴(kuò)增效率為94.4%,變異系數(shù)CV介于0.28-1.45%,線性范圍為4.68-1.58×107拷貝數(shù)/μL,最低檢測限為4.68拷貝/μL,回收率為91.4%。Oa IL-1Ra的線性關(guān)系表達(dá)式為y=-3.3888 x+41.452,相關(guān)系數(shù)R2為0.9995,擴(kuò)增效率97.3%,變異系數(shù)CV介于0.08-1.23%,線性范圍為5.31-2.27×107拷貝/μL,最低檢測限為5.31拷貝/μL,回收率為88.3%。運(yùn)用本實(shí)驗(yàn)所建立的反轉(zhuǎn)錄-實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法,分析182份臨床布魯氏菌病相關(guān)綿羊外周血白細(xì)胞樣本中Oa IL-1β及Oa IL-1Ra基因轉(zhuǎn)錄的豐度,初步確定Oa IL-1β與Oa IL-1Ra之間轉(zhuǎn)錄表達(dá)的平衡關(guān)系,本研究所建立的Oa IL-1β和Oa IL-1Ra反轉(zhuǎn)錄-熒光定量PCR檢測方法,為探討Oa IL-1β與Oa IL-1Ra平衡關(guān)系對維持機(jī)體穩(wěn)態(tài)和疾病診療的影響,以及能否用于輔助診斷布魯氏菌感染與免疫提供可應(yīng)用的檢測方法,并為進(jìn)一步研究Oa IL-1β與Oa IL-1Ra臨床應(yīng)用提供含量監(jiān)測工具。
【關(guān)鍵詞】：綿羊 白細(xì)胞 白介素1β 白介素1受體拮抗因子 反轉(zhuǎn)錄-實(shí)時(shí)熒光定量PCR
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S826
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-12
• 引言12-14
• 第一篇 文獻(xiàn)綜述14-28
• 第一章 IL-1 與IL-1Ra的研究進(jìn)展14-24
• 1.1 IL-1 家族激動劑成員概述14-15
• 1.2 IL-1R與IL-1Ra15-16
• 1.3 IL-1 家族的作用機(jī)制及信號調(diào)控16-17
• 1.4 IL-1 的生物學(xué)功能17-18
• 1.5 IL-1 與IL-1Ra的平衡對疾病的影響18-22
• 1.6 IL-1β與IL-1Ra的檢測方法22-24
• 第二章 熒光定量PCR技術(shù)在動物疾病方面研究進(jìn)展24-28
• 2.1 熒光定量PCR技術(shù)原理24
• 2.2 熒光定量PCR分類24-25
• 2.3 熒光定量PCR特點(diǎn)25-26
• 2.4 熒光定量PCR的應(yīng)用26-28
• 第二篇 研究內(nèi)容28-73
• 第一章 綿羊白介素 1β RT-qPCR檢測方法的建立28-47
• 1.1 材料28-30
• 1.2 方法30-38
• 1.3 結(jié)果38-45
• 1.4 討論45-46
• 1.5 小結(jié)46-47
• 第二章 綿羊白介素1受體拮抗因子RT-qPCR檢測方法的建立47-58
• 2.1 材料47-48
• 2.2 方法48-49
• 2.3 結(jié)果49-56
• 2.4 討論56-57
• 2.5 小結(jié)57-58
• 第三章 OaIL-1β及Oa IL-1Ra RT-q PCR檢測方法臨床樣品分析58-73
• 3.1 材料58
• 3.2 方法58-61
• 3.3 結(jié)果61-71
• 3.4 討論71-72
• 3.5 小結(jié)72-73
• 結(jié)論73-74
• 參考文獻(xiàn)74-82
• 導(dǎo)師簡介82-83
• 作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果83-84
• 致謝84

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：綿羊白介素1β及其受體拮抗因子熒光定量PCR檢測方法的建立與應(yīng)用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：382171