本文關(guān)鍵詞：山羊IFN-γ雜交瘤細(xì)胞的制備與鑒定，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：IFN-γ是反映機(jī)體細(xì)胞免疫功能水平的一個重要細(xì)胞因子,測定該細(xì)胞因子水平常用ELISA檢測試劑盒,IFN-γ單抗則是該試劑盒最為關(guān)鍵的試劑之一。目前尚未見有關(guān)于山羊IFN-γ單克隆抗體的報道,且IFN-γ具有較強(qiáng)的種屬特異性,無法利用其他物種的IFN-γELISA檢測試劑盒評估其水平�；谏鲜鲈�,本試驗(yàn)利用純化的山羊IFN-γ原核表達(dá)重組蛋白免疫BALB/c小鼠,采集小鼠血清,建立并優(yōu)化山羊IFN-γ抗體的ELISA測定方法;分離免疫小鼠脾細(xì)胞,與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞融合,制備并篩選分泌抗山羊IFN-γ單抗的雜交瘤細(xì)胞。研究取得如下結(jié)果:1.包被抗原濃度為10 ug/mL,4℃包被12 h,免疫血清孵育時間為60 min,羊抗小鼠酶標(biāo)抗體的稀釋度為1:5000的條件下,ELISA測定抗山羊IFN-γ抗體能夠獲得最佳結(jié)果。免疫小鼠3次后,小鼠血清效價達(dá)到105;2.SP2/0骨髓瘤細(xì)胞經(jīng)8-AG處理2次,可有效提高融合率,使其達(dá)到60%;3.篩選獲得一株雜交瘤細(xì)胞5D5B8,分泌的單抗能夠識別山羊rIFN-γ而不識別空載體標(biāo)簽融合蛋白,且與山羊IFN-γ陽性血清和Con A刺激的淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清反應(yīng)呈陽性;4.篩選出的雜交瘤細(xì)胞,經(jīng)過連續(xù)傳代和反復(fù)凍存復(fù)蘇后,仍能夠穩(wěn)定分泌IFN-γ單抗,培養(yǎng)上清的OD450值均在1.0左右;5.雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清效價為29,小鼠腹水效價為107,純化單克隆抗體效價為106。結(jié)果表明,本研究成功建立了山羊IFN-γ抗體的ELISA測定方法及山羊IFN-γ單抗雜交瘤細(xì)胞的制備方法,并且獲得一株能夠穩(wěn)定分泌識別山羊IFN-γ單抗的雜交瘤細(xì)胞,能夠用于山羊IFN-γ在蛋白質(zhì)水平上的檢測。
【關(guān)鍵詞】：山羊 IFN-γ ELISA 雜交瘤細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S827
【目錄】：

• 摘要6-7
• abstract7-11
• 第一章 IFN-γ 研究進(jìn)展11-21
• 1.1 IFN-γ 的分子生物學(xué)研究進(jìn)展11-15
• 1.1.1 IFN-γ 的結(jié)構(gòu)11-12
• 1.1.2 IFN-γ 受體12-14
• 1.1.3 IFN-γ 的作用機(jī)制14-15
• 1.2 IFN-γ 的理化性質(zhì)和免疫學(xué)活性15-16
• 1.2.1 IFN-γ 的理化性質(zhì)15
• 1.2.2 IFN-γ 的免疫學(xué)活性15-16
• 1.3 IFN-γ 與疾病16-19
• 1.3.1 IFN-γ 的抗病毒作用16-17
• 1.3.2 IFN-γ 與自身免疫病的關(guān)系17-18
• 1.3.3 IFN-γ 與腫瘤18-19
• 1.4 IFN-γ 檢測方法研究進(jìn)展19-20
• 1.5 本研究的目的意義20-21
• 第二章 山羊IFN-γ 抗體的制備及其ELISA檢測方法的建立21-32
• 2.1 材料21-24
• 2.1.1 菌株21
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)動物21
• 2.1.3 主要試劑21
• 2.1.4 主要儀器21-22
• 2.1.5 主要溶液的配制22-24
• 2.2 方法24-27
• 2.2.1 山羊IFN-γ 融合蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)24-25
• 2.2.2 山羊rIFN-γ 的純化25
• 2.2.3 小鼠免疫及其抗體的制備25-26
• 2.2.4 ELISA檢測方法的建立26-27
• 2.3 結(jié)果27-30
• 2.3.1 山羊rIFN-γ 的誘導(dǎo)表達(dá)鑒定結(jié)果27
• 2.3.2 羊抗小鼠IgG酶標(biāo)抗體的優(yōu)選稀釋度27-28
• 2.3.3 山羊rIFN-γ 的優(yōu)化包被濃度28
• 2.3.4 山羊rIFN-γ 的優(yōu)化包被時間28-29
• 2.3.5 免疫血清孵育時間的優(yōu)化結(jié)果29
• 2.3.6 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果29
• 2.3.7 抗山羊rIFN-γ 抗體效價測定結(jié)果29-30
• 2.4 討論30-31
• 2.5 小結(jié)31-32
• 第三章 雜交瘤細(xì)胞的制備與鑒定32-42
• 3.1 材料32-33
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)動物32
• 3.1.2 細(xì)胞32
• 3.1.3 主要試劑32
• 3.1.4 主要儀器32
• 3.1.5 主要溶液的配方32-33
• 3.2 方法33-36
• 3.2.1 抗原制備和小鼠免疫33-34
• 3.2.2 細(xì)胞融合34
• 3.2.3 雜交瘤細(xì)胞陽性克隆篩選34
• 3.2.4 陽性雜交瘤細(xì)胞克隆化-有限稀釋法34
• 3.2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)34-35
• 3.2.6 空載體融合標(biāo)簽蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)35
• 3.2.7 采集山羊外周血，分離血清及單個核細(xì)胞35
• 3.2.8 雜交瘤細(xì)胞特異性鑒定35
• 3.2.9 小鼠腹水的制備及純化35-36
• 3.2.10單克隆抗體效價的測定36
• 3.3 結(jié)果36-40
• 3.3.1 小鼠血清效價的測定結(jié)果36
• 3.3.2 細(xì)胞融合及陽性雜交瘤細(xì)胞篩選結(jié)果36-37
• 3.3.3 陽性雜交瘤細(xì)胞克隆化結(jié)果37-38
• 3.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果38
• 3.3.5 雜交瘤細(xì)胞特異性鑒定結(jié)果38
• 3.3.6 單克隆抗體純化結(jié)果38-39
• 3.3.7 單克隆抗體效價的測定結(jié)果39-40
• 3.4 討論40-41
• 3.5 小結(jié)41-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-50
• 致謝50-51
• 作者簡介51

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 杜偉賢;;雜交瘤細(xì)胞篩選中三種檢測方法的應(yīng)用[J];畜牧獸醫(yī)科技;1988年04期

2 陸蘋，胡志賢，倪學(xué)英，王欣;雜交瘤細(xì)胞在細(xì)胞反應(yīng)器中連續(xù)培養(yǎng)的研究[J];上海農(nóng)學(xué)院學(xué)報;1995年01期

3 尚農(nóng);雜交瘤細(xì)胞在細(xì)胞反應(yīng)器中連續(xù)培養(yǎng)[J];獸醫(yī)科技信息;1996年02期

4 陸蘋,王欣,胡志賢,王國豐,孫濤;用改良型5L細(xì)胞反應(yīng)器連續(xù)培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞[J];上海免疫學(xué)雜志;1999年03期

5 李健強(qiáng),DavidT.Shen,WilliamC.Davis;提高細(xì)胞融合率和雜交瘤細(xì)胞過量生長的方法[J];西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);1988年02期

6 Mats A.A.Persson;馮斌;;補(bǔ)加小鼠血清有利于雜交瘤細(xì)胞的生長[J];國外獸醫(yī)學(xué).畜禽疾病;1991年02期

7 謝琴,何存利,史建斌;單克隆抗體研制中雜交瘤細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇[J];寧夏農(nóng)林科技;1999年01期

8 張立,沈紅,張元興;在靜態(tài)和動態(tài)培養(yǎng)條件下雜交瘤細(xì)胞的生長和代謝[J];生物工程學(xué)報;2000年03期

9 趙麗;王鳳龍;楊慧;李鵬;劉滿杏;李霞;;分泌抗重金屬銅抗體的雜交瘤細(xì)胞克隆方法的建立[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2011年23期

10 張春紅,廖明,杜偉賢,辛朝安,黃忠,宋長緒,楊傲冰;分泌抗雞傳染性支氣管炎病毒單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株的建立[J];中國獸醫(yī)雜志;1998年12期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 趙黛堅;金一;傅紅興;;APA微囊包裹雜交瘤細(xì)胞的細(xì)胞制劑研究[A];2004年全國生物技術(shù)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2004年

2 陳如穎;張榮興;朱德厚;;動物細(xì)胞株系的質(zhì)量控制 四、雜交瘤細(xì)胞分泌活性的ELISA檢測[A];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會第五次會議論文摘要匯編[C];1992年

3 辛顏彬;苑錫銅;朱關(guān)福;;雜交瘤細(xì)胞懸浮培養(yǎng)方法的研究和應(yīng)用[A];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會第五次會議論文摘要匯編[C];1992年

4 賀稚非;佐佐木;毅;王光慈;李洪軍;闞建全;;枸杞對人雜交瘤細(xì)胞(HB_4C_5)產(chǎn)生IgM的影響研究[A];中國營養(yǎng)學(xué)會第五次營養(yǎng)資源與保健食品學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];1999年

5 黃永國;張春燕;龔勁松;陳妍;張波;李方和;;小鼠IgG定量ELISA檢測實(shí)驗(yàn)參比品的制備及其初步應(yīng)用[A];中國免疫學(xué)會第五屆全國代表大會暨學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2006年

6 童春香;戴信蘭;;在高滲培養(yǎng)條件下甜菜堿有提高雜交癌細(xì)胞抗體產(chǎn)生的作用[A];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會第五次會議論文摘要匯編[C];1992年

7 遲小偉;劉杰;;CHO細(xì)胞中可溶性IL-6Rβ亞基突變體的表達(dá)及活性探討[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議資料匯編[C];2008年

8 伍祥林;郭景元;;分泌抗人B型紅細(xì)胞單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株的研制[A];第五次全國法醫(yī)學(xué)術(shù)交流會論文集[C];1996年

9 宋娜玲;趙啟仁;張春明;褚麗萍;劉家慧;張桂華;劉潔;馬春節(jié);;從抗HCMHC McAb雜交瘤細(xì)胞中擴(kuò)增V_H和V_L基因[A];天津市核學(xué)會2005年學(xué)術(shù)交流會論文匯編[C];2005年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 王賢輝;抗凋亡與增殖抑制策略在雜交瘤細(xì)胞規(guī)�；囵B(yǎng)中應(yīng)用的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2004年

2 繆德年;囊素對雜交瘤細(xì)胞增殖和抗體分泌的影響及其信號通路[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

3 李兵;抗流感病毒B單抗雜交瘤細(xì)胞cDNA文庫的構(gòu)建及生物信息學(xué)分析[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2008年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 劉鶴媛;山羊IFN-γ雜交瘤細(xì)胞的制備與鑒定[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

2 趙宇航;狂犬病毒膠體金試紙條的制備和雜交瘤細(xì)胞株的免疫加強(qiáng)[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2010年

3 趙黛堅;APA微囊化雜交瘤細(xì)胞的制劑學(xué)研究[D];浙江大學(xué);2004年

4 劉明如;弓形蟲單克隆抗體的制備及生物學(xué)活性的初步鑒定[D];廣西大學(xué);2012年

5 胡春艷;衣原體噬菌體Vp1蛋白的表達(dá)、提純及雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)[D];天津醫(yī)科大學(xué);2008年

6 張敬梅;一株分泌豬IFN-γ單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞的制備與鑒定[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

7 方曉瑞;抗人肺癌單克隆抗體及其識別抗原的純化[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2012年

8 史蕾;氨芐青霉素免疫原性分析及其抗體制備[D];河北師范大學(xué);2014年

9 楊智紅;雜交瘤細(xì)胞分泌的uPA抗體對小鼠精子功能的影響[D];華中科技大學(xué);2008年

  本文關(guān)鍵詞：山羊IFN-γ雜交瘤細(xì)胞的制備與鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：381948