本研究以新孢子蟲和弓形蟲為研究對象，采用抑制差減雜交技術對新孢子蟲和弓形蟲差異表達基因進行分析，以期找到新孢子蟲特異基因以建立其檢測方法。首先采用SSH技術構建新孢子蟲和弓形蟲的差減文庫，然后經(jīng)生物信息學分析獲得新孢子蟲特異基因。結果表明從新孢子蟲和弓形蟲的差減文庫獲得新孢子蟲特異基因74個。利用NCLIV₀04830、表面蛋白NcMIC6和通過分析新孢子蟲基因組獲得的NcP40共3個基因分別建立了新孢子蟲特異檢測方法并應用這些方法進行了新孢子蟲病流行病學調查。 用SSH技術篩選到的特異基因NCLIV₀04830部分片段為目標DNA，設計一對新孢子蟲nested-PCR特異引物，建立新孢子蟲特異nested-PCR檢測方法并對反應條件進行優(yōu)化。并用該方法對沈陽地區(qū)犬新孢子蟲病進行了流行病學調查。結果表明，nested-PCR靈敏度明顯高于常規(guī)PCR，可檢測到1個蟲體基因組DNA。該方法特異性強，與Hammondia heydorni、弓形蟲、犬囊等孢球蟲無交叉反應。可用于新孢子蟲速殖子、包囊、卵囊階段的檢測。用本研究建立的nested-PCR...

【文章頁數(shù)】：130 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
內容提要
中文摘要
Abstract
前言
第一篇 文獻綜述
    第一章 新孢子蟲與弓形蟲差異研究進展
        1 新抱子蟲和剛地弓形蟲超微結構的比較
        2 交叉抗原及特異抗原的研究
        3 基因組差異比較
    第二章 新孢子蟲檢測方法研究進展
        1 免疫學方法
        2 分子生物學技術
第二篇 研究內容
    第一章 新孢子蟲與弓形蟲 SSH cDNA 文庫的構建
        1 材料與方法
        2 結果
        3 討論
        4 小結
    第二章 新孢子蟲 nested-PCR 檢測方法的建立
        1 材料與方法
        2 結果
        3 討論
        4 小結
    第三章 新孢子蟲 nested-PCR 檢測方法應用及 ITS-1 基因系統(tǒng)發(fā)育分析
        1 材料與方法
        2 結果
        3 討論
        4 小結
    第四章 新孢子蟲表面抗原 NcP40 和 NcMIC6 原核表達
        1 材料與方法
        2 結果
        3 討論
        4 小結
    第五章 牛新孢子蟲NcP40-ELISA 和 NcMIC6-ELISA 檢測方法建立73
        1 材料與方法
        2 結果
        3 討論
        4 小結
    第六章 新孢子蟲間接 NcP40-ELISA 檢測方法應用
        1 材料與方法
        2 結果
        3 討論
        4 小結
    結論
參考文獻
附錄
導師簡介
作者簡介
攻讀博士期間的科研成果
致謝



本文編號：3821569