本研究以新孢子蟲和弓形蟲為研究對象，采用抑制差減雜交技術(shù)對新孢子蟲和弓形蟲差異表達(dá)基因進(jìn)行分析，以期找到新孢子蟲特異基因以建立其檢測方法。首先采用SSH技術(shù)構(gòu)建新孢子蟲和弓形蟲的差減文庫，然后經(jīng)生物信息學(xué)分析獲得新孢子蟲特異基因。結(jié)果表明從新孢子蟲和弓形蟲的差減文庫獲得新孢子蟲特異基因74個(gè)。利用NCLIV₀04830、表面蛋白NcMIC6和通過分析新孢子蟲基因組獲得的NcP40共3個(gè)基因分別建立了新孢子蟲特異檢測方法并應(yīng)用這些方法進(jìn)行了新孢子蟲病流行病學(xué)調(diào)查。 用SSH技術(shù)篩選到的特異基因NCLIV₀04830部分片段為目標(biāo)DNA，設(shè)計(jì)一對新孢子蟲nested-PCR特異引物，建立新孢子蟲特異nested-PCR檢測方法并對反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化。并用該方法對沈陽地區(qū)犬新孢子蟲病進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查。結(jié)果表明，nested-PCR靈敏度明顯高于常規(guī)PCR，可檢測到1個(gè)蟲體基因組DNA。該方法特異性強(qiáng)，與Hammondia heydorni、弓形蟲、犬囊等孢球蟲無交叉反應(yīng)�？捎糜谛骆咦酉x速殖子、包囊、卵囊階段的檢測。用本研究建立的nested-PCR...

【文章頁數(shù)】：130 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
內(nèi)容提要
中文摘要
Abstract
前言
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 新孢子蟲與弓形蟲差異研究進(jìn)展
        1 新抱子蟲和剛地弓形蟲超微結(jié)構(gòu)的比較
        2 交叉抗原及特異抗原的研究
        3 基因組差異比較
    第二章 新孢子蟲檢測方法研究進(jìn)展
        1 免疫學(xué)方法
        2 分子生物學(xué)技術(shù)
第二篇 研究內(nèi)容
    第一章 新孢子蟲與弓形蟲 SSH cDNA 文庫的構(gòu)建
        1 材料與方法
        2 結(jié)果
        3 討論
        4 小結(jié)
    第二章 新孢子蟲 nested-PCR 檢測方法的建立
        1 材料與方法
        2 結(jié)果
        3 討論
        4 小結(jié)
    第三章 新孢子蟲 nested-PCR 檢測方法應(yīng)用及 ITS-1 基因系統(tǒng)發(fā)育分析
        1 材料與方法
        2 結(jié)果
        3 討論
        4 小結(jié)
    第四章 新孢子蟲表面抗原 NcP40 和 NcMIC6 原核表達(dá)
        1 材料與方法
        2 結(jié)果
        3 討論
        4 小結(jié)
    第五章 牛新孢子蟲NcP40-ELISA 和 NcMIC6-ELISA 檢測方法建立73
        1 材料與方法
        2 結(jié)果
        3 討論
        4 小結(jié)
    第六章 新孢子蟲間接 NcP40-ELISA 檢測方法應(yīng)用
        1 材料與方法
        2 結(jié)果
        3 討論
        4 小結(jié)
    結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
導(dǎo)師簡介
作者簡介
攻讀博士期間的科研成果
致謝



本文編號(hào)：3821569