奶牛乳腺炎是由環(huán)境變化引發(fā)奶牛機體狀態(tài)發(fā)生改變、乳腺機械損傷以及環(huán)境病原微生物接觸感染等多種因素引起的奶牛常見的臨床疾病之一。目前,最常見的原因是金黃色葡萄球菌和大腸桿菌這兩種病原微生物的入侵。乳腺組織被感染后,炎癥的侵襲會使乳腺上皮細胞的增殖活力以及泌乳能力都會受到影響,給奶牛養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟損失。目前已有大量研究表明分化相關基因1(N-myc downstream regulated gene 1,NDRG1)與多種腫瘤疾病相關,參與了炎性腫瘤微環(huán)境的調控,但NDRG1是否在奶牛乳腺炎的發(fā)生過程中發(fā)揮功能尚未見報道。對試驗前期高通量測序的結果分析后發(fā)現(xiàn),NDRG1在熱滅活的大腸桿菌(ATCC25922)和金黃色葡萄球菌(ATCC29213)誘導的炎性奶牛乳腺上皮細胞中相對于正常乳腺上皮細胞呈現(xiàn)高表達。首先通過實時熒光定量聚合酶鏈式反應(RT-q PCR)和蛋白免疫印記技術(western blot)對測序結果進行驗證,結果顯示NDRG1基因和蛋白在熱滅活的大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的的誘導下表達量均上升。另外,采用RT-q PCR的方法檢測了NDRG1在炎性乳腺組織和正常乳腺組織...

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
主要符號對照表
第一章 引言
    1.1 奶牛乳腺炎的研究進展
        1.1.1 奶牛乳腺炎的臨床特征
        1.1.2 奶牛乳腺炎的致病原因
        1.1.3 奶牛乳腺炎的危害
        1.1.4 奶牛乳腺炎的防治
    1.2 奶牛乳腺上皮細胞系(MAC-T)的研究進展
        1.2.1 MAC-T的建立
        1.2.2 MAC-T細胞的功能研究
    1.3 NDRG1 基因的研究進展
        1.3.1 NDRG1 概述
        1.3.2 NDRG1 與細胞增殖
        1.3.3 NDRG1 與炎性免疫應答
        1.3.4 NDRG1 與細胞內(nèi)物質合成
        1.3.5 NDRG1與mTOR信號通路
    1.4 n-3 多不飽和脂肪酸的研究進展
        1.4.1 n-3 多不飽和脂肪酸概述
        1.4.2 n-3PUFA與炎癥
        1.4.3 n-3PUFA與脂代謝
第二章 NDRG1對奶牛乳腺上皮細胞增殖和β-酪蛋白分泌的影響及機制
    2.1 材料
        2.1.1 乳腺組織和細胞
        2.1.2 試劑
        2.1.3 儀器設備
        2.1.4 主要試劑配制
    2.2 方法
        2.2.1 細胞培養(yǎng)
        2.2.2 體外建立炎性奶牛乳腺上皮細胞模型
        2.2.3 實時熒光定量PCR檢測
        2.2.4 蛋白免疫印跡試驗
        2.2.5 高通量測序
        2.2.6 過表達和干擾NDRG1 細胞系的建立
        2.2.7 細胞活力測定
        2.2.8 細胞遷移試驗
        2.2.9 酶聯(lián)免疫吸附試驗
        2.2.10 甘油三酯(TG)含量測定
        2.2.11 統(tǒng)計分析
    2.3 結果
        2.3.1 高通量測序結果中NDRG1 基因的表達
        2.3.2 NDRG1 在乳腺炎細胞模型中的表達
        2.3.3 NDRG1 在奶牛乳腺組織中的表達
        2.3.4 過表達NDRG1 穩(wěn)轉細胞系的建立
        2.3.5 干擾NDRG1 穩(wěn)轉細胞系的建立
        2.3.6 NDRG1對MAC-T細胞系促炎性細胞因子和趨化因子表達量的影響
        2.3.7 NDRG1對MAC-T細胞系增殖和遷移能力的影響
        2.3.8 NDRG1對MAC-T細胞系泌乳能力的影響
        2.3.9 NDRG1 通過mTOR通路發(fā)揮功能
    2.4 討論
    2.5 小結
第三章 n-3PUFA與NDRG1對奶牛乳腺上皮細胞泌乳功能的影響
    3.1 材料
        3.1.1 細胞
        3.1.2 試劑
        3.1.3 儀器設備
    3.2 方法
        3.2.1 細胞培養(yǎng)
        3.2.2 細胞毒性試驗
        3.2.3 實時熒光定量PCR
        3.2.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗
        3.2.5 甘油三酯測定
        3.2.6 統(tǒng)計分析
    3.3 結果
        3.3.1 n-3PUFA濃度對MAC-T細胞的毒性探究
        3.3.2 n-3PUFA對 MAC-T細胞系NDRG1 基因表達量的影響
        3.3.3 n-3PUFA與 NDRG1對MAC-T細胞系促炎性細胞因子表達量的影響
        3.3.4 n-3PUFA與 NDRG1對MAC-T細胞系β-酪蛋白分泌的影響
        3.3.5 n-3PUFA與 NDRG1對MAC-T細胞系甘油三酯分泌的影響
    3.4 討論
    3.5 小結
全文結論
創(chuàng)新之處
參考文獻
致謝
作者簡介



本文編號：3820574