為了建立檢測(cè)西藏環(huán)狀病毒(Tibet orbivirus,TIBOV)的快速核酸檢測(cè)方法,根據(jù)新分離的西藏環(huán)狀病毒(DH13C120)Seg-10基因序列,設(shè)計(jì)了特異性引物及探針。通過(guò)優(yōu)化反應(yīng)條件,建立了檢測(cè)西藏環(huán)狀病毒核酸的熒光定量RT-PCR方法,并對(duì)該方法的特異性、敏感性和重復(fù)性進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果顯示,該方法在2.31×10⁸～2.31×10²copies/μL質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品濃度之間具有良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)為0.999;組內(nèi)與組間的變異系數(shù)均小于2%;最低檢測(cè)下限為2.31×10¹copies/μL;對(duì)藍(lán)舌病病毒、鹿流行性出血熱病毒、阿卡斑病毒、蓋塔病毒和流行性乙型腦炎病毒檢測(cè)結(jié)果均為陰性,無(wú)交叉反應(yīng);對(duì)云南新分離的9株西藏環(huán)狀病毒進(jìn)行檢測(cè),拷貝數(shù)在3.23×10⁵～1.54×10⁶copies/μL之間,準(zhǔn)確率為100%;對(duì)2013年采集自云南江城縣的48份牛血液樣品進(jìn)行檢測(cè),檢出西藏環(huán)狀病毒陽(yáng)性3份。結(jié)果表明,本研究建立的西藏環(huán)狀病毒熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法具有良好...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 病毒株
    1.2 主要試劑和儀器
    1.3 引物及探針的設(shè)計(jì)與合成
    1.4 病毒RNA提取及c DNA合成
    1.5 重組質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的制備
    1.6 反應(yīng)條件的優(yōu)化
    1.7 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
    1.8 特異性試驗(yàn)
    1.9 敏感性試驗(yàn)
    1.1 0 重復(fù)性試驗(yàn)
    1.1 1 熒光定量RT-PCR方法的應(yīng)用
2 結(jié)果
    2.1 重組質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的制備
    2.2 反應(yīng)條件的優(yōu)化
    2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
    2.4 特異性分析
    2.5 敏感性分析
    2.6 重復(fù)性分析
    2.7 樣品檢測(cè)
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