采集美利奴綿羊的十二指腸,在解剖顯微鏡下剝?nèi)ヰつ蛹梆つは聦?剪碎后采用Ⅱ型膠原酶和胰酶消化并分離獲得綿羊十二指腸原代Cajal間質(zhì)細(xì)胞(ICC);傳代培養(yǎng)后,通過倒置顯微鏡觀察不同時間的細(xì)胞形態(tài),使用反轉(zhuǎn)錄PCR和免疫熒光染色檢測ICC特異性標(biāo)記物c-Kit。結(jié)果顯示,成功分離了ICC,且細(xì)胞在培養(yǎng)24 h后貼壁,呈現(xiàn)出其固有的形態(tài)。RT-PCR檢測c-kit基因為陽性,免疫熒光染色鑒定ICC表達c-Kit蛋白。本試驗成功分離ICC且傳代后細(xì)胞穩(wěn)定增殖生長,為后期開展病原微生物導(dǎo)致ICC改變造成胃腸道炎性病變提供材料。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試驗樣品
    1.2 試劑和儀器
    1.3 ICC的分離與培養(yǎng)
        1.3.1 ICC的分離
        1.3.2 ICC的換液及傳代
    1.4 ICC的鑒定
        1.4.1 ICC的總RNA提取及反轉(zhuǎn)錄
        1.4.2 引物設(shè)計
        1.4.3 c-kit基因檢測
        1.4.4 免疫熒光染色
2 結(jié)果
    2.1 ICC分離培養(yǎng)及形態(tài)特征
    2.2 RT-PCR檢測c-kit基因表達情況
    2.3 免疫熒光染色檢測c-Kit蛋白表達情況
3 討論
    3.1 ICC分類及功能
    3.2 ICC分離及鑒定方法
    3.3 ICC分離培養(yǎng)時注意事項



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