H9N2亞型禽流感病毒作為最主要的低致病性禽流感毒株廣泛流行于我國,對養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。此外,該病毒還具有直接感染人、或?yàn)楦咧虏⌒郧萘鞲胁《綡5N1以及新型H7N9亞型禽流感病毒提供內(nèi)部基因的能力,從而感染人,嚴(yán)重威脅著公共衛(wèi)生安全,更加引起人們對H9N2亞型禽流感病毒關(guān)注。 為了研究H9N2亞型禽流感病毒對哺乳動(dòng)物的致病力,對實(shí)驗(yàn)室分離到的19株H9N2亞型禽流感病毒進(jìn)行了病毒純化,并用純化后的病毒滴鼻感染BALB/c小鼠,每株病毒感染6只,感染劑量106EID50/只。結(jié)果發(fā)現(xiàn),隨著年份的推移該H9N2亞型禽流感病毒的致病力有所改變,2012年分離的毒株雖然總的感染量低于2010-2011年份的毒株,但仍有較高致病力的毒株存在。 為了研究H9N2亞型禽流感病毒在基因水平上的遺傳演化趨勢,及其與新型H7N9禽流感、高致病性禽流感病毒基因序列的聯(lián)系,本試驗(yàn)對上述19株H9N2亞型禽流感病毒及實(shí)驗(yàn)室已測序的26株病毒進(jìn)行遺傳演化分析。HA基因演化分析顯示,45株H9N2亞型禽流感病毒主要屬于Ck/BJ/1/94分支,而在這個(gè)大分支里有多達(dá)34株病毒都劃分到了未有文獻(xiàn)報(bào)道的第三小...

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
目錄
摘要
前言
    1 H9N2亞型禽流感病毒
    2 禽流感的歷史發(fā)展
    3 禽流感病毒的結(jié)構(gòu)組成
    4 禽流感病毒致病性的分子基礎(chǔ)
        4.1 HA基因
        4.2 NA基因
        4.3 NP基因
        4.4 M基因
        4.5 NS基因
        4.6 聚合酶蛋白
    5 A型流感反向遺傳操作系統(tǒng)
    6 禽流感滅活苗的研究進(jìn)展
    7 本研究的目的和意義
第一章 H9N2亞型禽流感病毒的純化及對BALB/c小鼠的致病性研究
    1 材料與方法
        1.1 病毒分離株
        1.2 SPF雞胚及試驗(yàn)動(dòng)物
        1.3 主要試劑和儀器
        1.4 血凝(HA)試驗(yàn)
        1.5 病毒的有限稀釋法純化及EID₅₀測定
        1.6 滴鼻感染BALB/c小鼠
        1.7 臟器病毒含量的滴定
    2 結(jié)果
        2.1 病毒純化的結(jié)果
        2.2 19株H9N2亞型禽流感病毒EID₅₀結(jié)果
        2.3 19株H9N2亞型禽流感病毒BALB/c小鼠臟器的分離結(jié)果
        2.4 BALB/c小鼠接毒H9N2流感病毒后的臨床癥狀
    3 分析與討論
第二章 H9N2亞型禽流感病毒全基因組測序及遺傳分析
    1 材料與方法
        1.1 試驗(yàn)用毒株
        1.2 參考毒株
        1.3 主要試劑與儀器
        1.4 PCR及測序用引物
        1.5 RNA的提取
        1.6 反轉(zhuǎn)錄
        1.7 目的片段的獲得及測序
        1.8 序列拼接與分析
    2 結(jié)果
        2.1 PCR結(jié)果
        2.2 HA基因的遺傳演化
        2.3 NA基因的遺傳演化
        2.4 PB2基因的遺傳演化
        2.5 PB1基因的遺傳演化
        2.6 PA基因的遺傳演化
        2.7 NP基因的遺傳演化
        2.8 M基因的遺傳演化
        2.9 NS基因的遺傳演化
    3 分析與討論
第三章 H9N2亞型禽流感病毒細(xì)胞苗的初步研制及其對雞的免疫效果評估
    1 材料與方法
        1.1 毒株及細(xì)胞
        1.2 SPF雞胚及試驗(yàn)動(dòng)物
        1.3 主要試劑與儀器
        1.4 種毒的擴(kuò)增
        1.5 TCID₅₀的測定
        1.6 H9N2亞型禽流感病毒在轉(zhuǎn)瓶細(xì)胞上增殖條件的優(yōu)化
        1.7 疫苗的制備
        1.8 最小免疫劑量
    2 結(jié)果
        2.1 SH441HANAPR8(NS mutant)病毒TCID₅₀的測定結(jié)果
        2.2 病毒感染劑量的測定結(jié)果
        2.3 接毒后維持液的測定結(jié)果
        2.4 轉(zhuǎn)瓶接毒后維持液終體積確定
        2.5 滅活劑的優(yōu)化條件
        2.6 最小免疫劑量的結(jié)果
    3 分析與討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
Abstract
附錄
在讀期間發(fā)表論文
致謝



本文編號：3811920