肉質(zhì)是畜禽生產(chǎn)的重要經(jīng)濟(jì)性狀,其中一個(gè)重要的影響因素就是肌纖維。肌纖維類型與肉質(zhì)的關(guān)系十分密切,其中慢肌纖維比例高的肌肉肉質(zhì)更好,它是在很多基因控制下的產(chǎn)物。鈣調(diào)磷酸酶(calcineurin,CaN)是一種常見(jiàn)的細(xì)胞信號(hào)分子,它參與的CaN/NFAT信號(hào)通路可以影響肌纖維類型,尤其是對(duì)促進(jìn)慢肌纖維的轉(zhuǎn)變有重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)鈣調(diào)磷酸酶肌小節(jié)結(jié)合蛋白基因家族(MYOZs)可以通過(guò)改calcineurin的活性來(lái)影響肌纖維類型的轉(zhuǎn)變,從而影響畜禽的肉質(zhì)。為了探究天府肉羊MYOZ2基因和MYOZ3基因在肌纖維轉(zhuǎn)化方面的作用,本試驗(yàn)利用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)、分子克隆、實(shí)時(shí)熒光定量(RT-qPCR)以及蛋白免疫印跡法(western blotting)等實(shí)驗(yàn)技術(shù)對(duì)MYOZ2基因和MYOZ3基因進(jìn)行了初步的研究,結(jié)果如下：1.本研究成功獲得天府肉羊MYOZ2基因和MYOZ3基因的cDNA全部編碼序列,MYOZ2基因序列長(zhǎng)856bp,包含一個(gè)長(zhǎng)度為795bp的ORF框,編碼264個(gè)氨基酸...

【文章頁(yè)數(shù)】：61 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
常用詞語(yǔ)縮寫
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 肌纖維的類型
    1.2 肌纖維的特點(diǎn)
    1.3 Ⅰ型肌纖維對(duì)肌肉品質(zhì)的影響
        1.3.1 肉色
        1.3.2 pH值
        1.3.3 嫩度
        1.3.4 風(fēng)味
        1.3.5 系水力
    1.4 鈣調(diào)磷酸酶在肌纖維分化上的作用
    1.5 鈣調(diào)磷酸酶肌小節(jié)結(jié)合蛋白家族的研究現(xiàn)狀
    1.6 本研究目的及意義
2 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及樣品采集
        2.1.2 主要儀器設(shè)備
        2.1.3 主要試劑及試劑盒
        2.1.4 主要試劑的配制
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 組織樣總RNA的抽取
        2.2.2 總RNA的質(zhì)量與濃度檢測(cè)
        2.2.3 cDNA第一條鏈的合成
        2.2.4 特異性引物設(shè)計(jì)
        2.2.5 MYOZ2和MYOZ3基因的cDNA的克隆測(cè)序
            2.2.5.1 常規(guī)PCR
            2.2.5.2 PCR產(chǎn)物的純化回收
            2.2.5.3 目的基因與pMD19-T載體的連接
            2.2.5.4 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化
            2.2.5.5 陽(yáng)性克隆篩選及測(cè)序
        2.2.6 熒光定量PCR
            2.2.6.1 標(biāo)準(zhǔn)品的制備
            2.2.6.2 定量PCR
        2.2.7 蛋白免疫印跡
            2.2.7.1 組織總蛋白的提取
            2.2.7.2 組織樣蛋白含量測(cè)定
            2.2.7.3 SDS-聚丙酰胺凝膠電泳
            2.2.7.4 切膠與轉(zhuǎn)膜
            2.2.7.5 免疫反應(yīng)
            2.2.7.6 化學(xué)發(fā)光與成像
    2.3 數(shù)據(jù)分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 天府肉羊MYOZ2和MYOZ3基因的克隆
        3.1.1 組織樣的總RNA提取
        3.1.2 PCR結(jié)果
        3.1.3 克隆產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果
    3.2 天府肉羊MYOZ2和MYOZ3基因生物信息學(xué)分析
        3.2.1 天府肉羊MYOZ2基因的生物信息學(xué)分析
            3.2.1.1 天府肉羊MYOZ2基因的序列比對(duì)
            3.2.1.2 MYOZ2基因CDS序列的堿基組成
            3.2.1.3 MYOZ2蛋白性質(zhì)分析
            3.2.1.4 MYOZ2蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
            3.2.1.5 MYOZ2的系統(tǒng)發(fā)育分析
        3.2.2 天府肉羊MYOZ3基因的生物信息學(xué)分析
            3.2.2.1 天府肉羊MYOZ3基因的序列比對(duì)
            3.2.2.2 MYOZ3基因CDS序列的堿基組成
            3.2.2.3 MYOZ3蛋白性質(zhì)分析
            3.2.2.4 MYOZ3蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
            3.2.2.5 MYOZ3的系統(tǒng)發(fā)育分析
    3.3 mRNA的表達(dá)
        3.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
        3.3.2 天府肉羊MYOZ2和MYOZ3基因的mRNA表達(dá)
            3.3.2.1 天府肉羊MYOZ2基因的mRNA表達(dá)
            3.3.2.2 天府肉羊MYOZ3基因的mRNA表達(dá)
    3.4 蛋白質(zhì)的表達(dá)
        3.4.1 天府肉羊MYOZ2蛋白的表達(dá)
        3.4.2 天府肉羊MYOZ3的蛋白表達(dá)
4 討論
    4.1 MYOZ2基因和MYOZ3基因的生物信息學(xué)分析
        4.1.1 MYOZ2基因和MYOZ3基因的序列分析
        4.1.2 MYOZ2蛋白和MYOZ3蛋白的理化性質(zhì)分析
        4.1.3 MYOZ2蛋白和MYOZ3蛋白結(jié)構(gòu)的預(yù)測(cè)分析
    4.2 mRNA的表達(dá)分析
        4.2.1 不同組織表達(dá)分析
        4.2.2 不同生長(zhǎng)階段表達(dá)分析
    4.3 蛋白質(zhì)的表達(dá)分析
        4.3.1 不同組織表達(dá)分析
        4.3.2 不同生長(zhǎng)階段表達(dá)分析
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
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本文編號(hào)：3809941